[發明專利]馬鈴薯抗低溫糖化分子標記組合及其在馬鈴薯抗低溫糖化育種中的應用

在審

• 申請號: 201610284961.9
• 申請日: 2016-04-29
• 公開（公告）號: CN105713991A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 宋波濤;肖桂林;謝從華;柳俊;黃維;曹紅菊;彭曉君
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.馬鈴薯低溫糖化抗性的分子標記組合，其特征在于，所述分子標記為S3001-S3004核酸序列中的任一種或多種；

S3001分子標記的上下游引物核酸序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，S3002分子標記的上下游引物核酸序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示，S3003分子標記的上下游引物核酸序列如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示，S3004分子標記的上下游引物核酸序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示。

2.權利要求1所述的馬鈴薯低溫糖化抗性的分子標記的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)、以母本ED25和父本CW2-1以及兩者雜交產生的后代作為材料；

(b)、提取材料的基因組DNA；

(c)、利用SSR分子標記、AFLP分子標記以及根據基因組序列設定的分子標記篩選馬鈴薯低溫糖化抗性的分子標記，得到親本之間的多態性引物，用于連鎖圖譜構建；

(d)、利用多態性引物對步驟(b)提取的兩者雜交產生的后代的基因組DNA進行擴增，結合測定的低溫糖化性狀進行相關分析，通過QTL定位，得到所述的馬鈴薯低溫糖化抗性的分子標記。

3.一種馬鈴薯低溫糖化抗性的檢測方法，其特征在于，是以權利要求1中的引物對不同基因型的馬鈴薯基因組提取物進行PCR擴增，分別對應得到S3001的PCR擴增產物、S3002的PCR擴增產物、S3003的PCR擴增產物和S3004的PCR擴增產物；

S3001的PCR擴增產物和S3002的PCR擴增產物直接進行檢測，S3003的PCR擴增產物先采用AluI酶酶切，酶切產物再進行檢測，S3004的PCR擴增產物先采用AfaI酶酶切，酶切產物然后進行檢測；

各分子標記采用的PCR擴增程序依次為：95℃預變性3min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，循環11次，每次循環退火溫度降0.5℃；94℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸60s，循環33次；72℃延伸5min；4-10℃保存。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，各分子標記的PCR體系均為15-25μl；馬鈴薯樣本的基因組提取物在PCR體系中的添加量為50ng-200ng。

5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，檢測抗低溫糖化馬鈴薯基因型表現為S3001無目標帶，S3002分子標記、S3003分子標記和S3004分子標記均有目標條帶。

6.根據權利要求3-5任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測采用6％±0.5％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進行，然后進行銀染，觀察結果即可。