[發明專利]絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法

有效

• 申請號: 201610271956.4
• 申請日: 2016-04-28
• 公開（公告）號: CN105766655B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 劉克明;田學輝
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

1.絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)外植體消毒及無菌苗的培養

將采集的絨毛皂莢種子于超凈工作臺消毒清洗備用，將消毒后的種子接種在培養基上培養無菌苗；

2)愈傷組織的誘導

取種子無菌苗子葉，切成適當大小接種在MS+6-BA3.0mg/L+KT0.3-0.6mg/L+IAA0.1-0.3mg/L培養基上同步誘導出愈傷組織和芽；

3)不定芽的增殖

將不定芽接種于1/2MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1-0.5mg/L+NAA0.2-0.6mg/L培養基中進行增殖培養；

4)不定芽生根培養和馴化移栽

待不定芽長至2.0～4.0cm時，接種到MS+IAA 0.25mg/L+NAA 0.5mg/L生根培養基上，溫度控制在24±2℃，光照12h/d，光強2000lx。

2.根據權利要求1所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟1)所述的外植體消毒過程如下：將采集的絨毛皂莢種子于超凈工作臺70％酒精處理30s，再用0.1％升汞消毒30min，無菌水清洗5次備用；所述的無菌苗的培養過程如下：將消毒后的種子接種在MS培養基上,18-22℃進行發芽試驗，待培養至無菌苗長至5-7cm時用于步驟2)。

3.根據權利要求1所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟2)取種子無菌苗子葉，將子葉切成1cm²大小，用于接種，步驟2)的MS培養基中蔗糖為3％，瓊脂為0.5％，pH值為5.90-5.95。

4.根據權利要求1所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟3)中待不定芽的幼苗長至1～2cm時接種于培養基中進行增殖培養。

5.根據權利要求1或3或4所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟2)和3)培養時每日補充光照12h，光照強度為2000-2500lx，溫度22±2℃。

6.根據權利要求1所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟4)將已經生根的苗置于煉苗室煉苗，煉苗床基質配比為園土與椰糠、泥沙體積比為1:2:1。

7.根據權利要求1所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟2)將絨毛皂莢子葉在MS+6-BA3.0mg/L+KT0.4mg/L+IAA0.3mg/L培養基上同步誘導出愈傷和芽。

8.根據權利要求1所述的絨毛皂莢組織培養再生體系的建立方法，其特征在于，步驟3)中不定芽增殖的培養基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L。