[發明專利]一種鑒定甘蔗抗褐銹病基因位點緊密連鎖的分子標記方法有效
| 申請號: | 201610271692.2 | 申請日: | 2016-04-28 |
| 公開(公告)號: | CN105713989B | 公開(公告)日: | 2019-03-22 |
| 發明(設計)人: | 郭晉隆;盧運海;許莉萍;王恒波;闕友雄;劉迪;肖乃衍;陳平華 | 申請(專利權)人: | 福建農林大學 |
| 主分類號: | C12Q1/6895 | 分類號: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司: | 福州元創專利商標代理有限公司 35100 | 代理人: | 蔡學俊 |
| 地址: | 350002 福*** | 國省代碼: | 福建;35 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 鑒定 甘蔗 銹病 基因 緊密 連鎖 分子 標記 方法 | ||
1.一種用于鑒定甘蔗抗褐銹病基因位點緊密連鎖的分子標記方法,其特征在于:包括如下步驟:分別以待鑒定甘蔗和“POJ2878”的基因組DNA為模板,PCR 擴增體系:2×PremixEx TaqMix PCR Buffer 12.5μL,10μmol/L引物1和引物2各0.5μL,25 ng/μL模板DNA 2μL,加滅菌雙蒸水使總體積為25μL;擴增程序如下:94 ℃ 5 min ;94 ℃ 30 S,56 ℃ 30 S,72℃ 40 S,34個循環;72℃ 7 min;
將擴增的PCR產物利用限制性核酸內切酶HaeIII 進行酶切,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切產物,確定待鑒定甘蔗對褐銹病的抗性:如果待鑒定甘蔗的酶切產物電泳條帶有與POJ2878帶型相同的條帶,則待鑒定甘蔗為抗褐銹病甘蔗,如果待鑒定甘蔗的酶切產物電泳條帶沒有與POJ2878帶型相同的條帶,則待鑒定甘蔗為非抗褐銹病甘蔗,酶切產物經過膠回收及測序,抗性片段大小為389 bp,其余條帶為非特異性擴增;
所述引物1:29-5’-TTTATAAATTACCATTAAGGACCAT-3’;引物2:417-5’-CAGCATTTAAGATGGCATAGGCGTC-3’。
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