[發明專利]潛在EZH2小分子抑制劑及其合成方法

有效

• 申請號: 201610269745.7
• 申請日: 2016-04-27
• 公開（公告）號: CN105777718B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 姚志藝;張曉攀
• 申請（專利權）人: 上海應用技術學院
• 主分類號: C07D403/12
• 分類號: C07D403/12;A61K31/513;A61P35/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 楊軍

本發明公開了一種潛在EZH2小分子抑制劑及其合成方法。其合成方法的具體步驟如下：①將5?巰基?1?苯基四氮唑和4?氯乙酰乙酸乙酯在強堿作用下反應得到第一中間體；②將第一中間體在強堿作用下和鹽酸胍反應得到第二中間體；③將第二中間體和異氰酸酯類或者異硫氰酸酯類化合物反應，生成目標化合物。本發明分離過程簡單，不需要柱層析分離，步驟簡單，方便進行工業化生產。本發明合成的目標化合物有很好的EZH2抑制活性，為惡性腫瘤藥物的研發提供了一類新的小分子結構，這類小分子結構具有多樣性，進一步的研究有助于開它的藥用價值。

技術領域

本發明屬于醫藥化工技術領域，尤其涉及EZH2小分子抑制劑及其合成方法。

背景技術

在過去的幾年，表觀遺傳修飾，如DNA的甲基化、組蛋白的甲基化和乙酰化已經顯示出對腫瘤的治療有著良好的前景。研究發現，在血液性疾病和實體瘤中，如霍奇金病、非霍奇金瘤、前列腺癌、乳腺癌、咽喉癌，都發現了EZH2的過表達，這表明EZH2的過表達與腫瘤的產生及惡化都有著緊密的聯系。因此，很多研究人員將其列為一個治療癌癥的重要靶點，開發相應的抑制劑。這幾年里，已經有幾個有效的藥物被用作臨床抗腫瘤新藥,如5-氮雜胞苷,5-氮-2-脫氧胞苷，和GSK126。進一步的研究發現，組蛋白的甲基化是一個高度可逆的過程，它與多個腫瘤的發生和發展都有著緊密聯系。GSK126是第一個進入臨床的組蛋白甲基化抑制劑，并取得了良好的效果。所以，對于EZH2的深入研究就變得十分的必要，只有更全面的了解EZH2的結構和生物功能，才能開發出更多高效、高選擇性的抑制劑，為惡性腫瘤的治療帶來新的希望。

在對PRC2的研究更加的深入后，幾種潛在的EZH2抑制劑正逐漸出現在人們的視野中。這些抑制劑中，DZNep可以通過和H3K27me3相互作用來抑制EZH2的表達，這樣通過間接的作用就可以達到使腫瘤細胞被抑制的目的。DZNep干擾S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶的新陳代謝，這樣就降低了細胞的生存時間和能力，進而間接的抑制甲基化反應。DZNep誘導細胞凋亡能力與抑制PRC2的途徑有著緊密的關系，雖然確切的機制尚未能夠研究清楚。此外，已有文獻報道，DZNep和組蛋白去乙酰酶抑制劑是互相作用的。同時，它還與激活沉默基因的DNA甲基轉移酶抑制劑相互協作。作為一個抗病毒化合物,DZNep在人體內的毒性很小。同時，它在癌細胞的表觀遺傳途徑中也有著很重要的作用，所以它可能是一種有前景的抗癌候選藥物。

在過去幾年里的測試，發現這些小分子有很好的選擇性，并且對特定細胞的抑制活性也很高。不像其他類的一些小分子，同時對很多的細胞都有抑制的效果，沒有很好的選擇性，達不到殺死特定惡性腫瘤細胞的目的。近期，通過研究發現，淋巴瘤中的EZH2都是高度表達的,所以要抑制住EZH2的過表達,這樣可以使淋巴瘤不會繼續的增殖和惡化。研究人員在前列腺癌和骨髓癌中也觀察到EZH2發生了突變和失活。為此，研究人員開發了一些抑制劑,它可以與酶蛋白相互作用,占用SAM的結合位點,再來和SAM競爭,這樣EZH2的高表達就可以得到有效的抑制,通過這個理念，從而開發出有效的高選擇性競爭性抑制劑。

通過PRC2復合物的高通量生物篩選實驗，來確定EZH2甲基轉移酶的活性。幾個有潛力的抑制小分子已經被篩選出來。雖然活性位點的結構還沒有確定，但保守域SET結構顯示了兩個基本的結合口袋：一個是用于SAM的甲基供體，另一個是用于Lys27的基質。在人體中已經發現了50多個SET結構域蛋白，所以抑制劑對EZH2中的SET結構域的選擇變得很重要。

在2012年年底,幾個SAM的競爭型抑制劑已經被發現,化合物EPZOO5687對EZH2的選擇性與另外的15個PMTs相比,超過500倍。EPZ005687還可以抑制EZH2上的Y641和A677突變引起的H3K27甲基化，發現該化合物可以有選擇性的殺死由EZH2突變引起的淋巴瘤細胞。