[發明專利]一種快速準確鑒定水稻生長早期的香與非香植株的方法

有效

• 申請號: 201610269139.5
• 申請日: 2016-06-28
• 公開（公告）號: CN107290440B
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 胡培松;唐紹清;謝黎虹;魏祥進;焦桂愛;邵高能;圣忠華
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 王江成;侯蘭玉

本發明涉及一種植物品種鑒定方法，特別涉及一種快速準確鑒定水稻生長早期的香與非香植株的方法。該方法包括如下步驟：步驟1：樣品的制備水稻抽穗初期的葉片用液氮磨碎，稱樣量為20 mg?50 mg，入頂空樣品瓶備用；步驟2：樣品進行自動固相微萃取階段，萃取分為三階段1)第一階段：80℃保持預加熱2?5分鐘；2)第二階段：采用萃取頭以80℃,轉速250 rpm/min,搖20 S,停5 S的間隔步驟，萃取頭插入進樣瓶的深度為22毫米，此萃取階段持續10?15分鐘。3）第三階段：萃取物直接入氣質聯用儀的進樣口,進樣時間為1分鐘,進樣溫度為260℃；步驟3：樣品進入氣質聯用儀進行分析。

技術領域

本發明涉及一種植物品種鑒定方法，特別涉及一種快速準確鑒定水稻生長早期的香與非香植株的方法。

背景技術

香稻，以其清香可口而深受國內外消費者喜愛，市場上優質香米售價一般是普通稻米的2～3倍。香稻資源豐富、栽培歷史悠久，幾乎遍及世界各稻米生產國，印度、泰國、巴基斯坦、越南、日本和美國等都有自己的優質香稻品種；如印度的巴斯馬蒂香稻（Basmati），泰國的Khao Dawk Mail 105，澳大利亞的Goolarah,美國的Della，伊朗Sadri，日本的祝賀，中國的萬年香米等均是著名的香稻品種類。現中國眾多的育種家都很重視對香稻品種的選育。大多數研究表明水稻的香味遺傳是受單隱性基因控制。在香稻常規育種工作中，最常用的方法有雜交育種，而此選育過程中對F₂代及多代的香味植株的篩選非常重要。現一般常規容易做的還是參照Sood等1988年創立的氫氧化鉀溶液浸泡法進行香味鑒定方法；即葉片剪碎，浸入1.7 %濃度的氫氧化鉀后聞嗅而評判香味有否。此方法容易帶有個人感官經驗性而使評判有主觀性和不穩定性，甚至會有誤判。同理，咀嚼法 、熱水法、顯色法等傳統感官鑒評均存在人員感官差異，結果準確性和可靠性難以保證。儀器法具有靈敏度高、結果準確等優點，能有效彌補上述方法的缺陷。儀器分析方法但目前應用于稻米香氣收集的技術，如超臨界流體萃取 、頂空氣體捕集 、同時蒸餾萃取和柱吸附等技術，存在樣品及試劑消耗量大、操作步驟復雜和收集濃縮耗時等缺點，難以滿足育種工作中大批量試驗材料的鑒定工作。目前對香稻研究已三十多年，迄今已報道的香稻中的香味揮發物有200余種，只確定少數幾種與米飯的香味或風味有關（Champage, 2008; Cho等2014）。美國威斯頓地區研究中心(WRRC)Buttery等1982年首次分離和鑒定出水稻香味的主要成分：2-乙酰-1-吡咯啉(2-acetyl-1-pyrroline，2-AP)，并提出此物質是幾個亞洲水稻品種呈香味的主要緣由；同時我們實驗室已得到數據結果是若是香稻，則整個生長期的植株葉子均是香的；反之，則均沒有香味。正是基于此兩因素，我們提出早期鑒定植株葉片的2-AP而來評判是否是香稻。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速準確鑒定水稻生長早期的香與非香植株的方法，通過優化自動固相微萃取程序, 快速鑒定香稻中香味主要特征香味物質2-乙酰-1-吡咯啉。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種快速準確鑒定水稻生長早期的香與非香植株的方法，該方法包括如下步驟：

步驟1：樣品的制備 水稻抽穗初期的葉片用液氮磨碎，稱樣量為20 mg- 50 mg，入頂空樣品瓶備用；

步驟2：樣品進行自動固相微萃取階段，萃取分為三階段

1)第一階段：80℃保持預加熱2-5分鐘；

2)第二階段：采用萃取頭型號為fiber(聚二甲基硅烷/二乙烯苯/; 65μm )或fiber (CAR/DVB/PDMS; 50/30 μm ,1 cm長) 以80℃ ,轉速250 rpm/min,搖20 S, 停5 S的間隔步驟，萃取頭插入進樣瓶的深度為22毫米，此萃取階段持續10-15分鐘；

3）第三階段：萃取物直接入氣質聯用儀的進樣口,進樣時間為1分鐘,進樣溫度為260℃；