[發(fā)明專利]一種用于對食品中的麥角菌進(jìn)行鑒定的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610268387.8 | 申請日： | 2016-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN105886619B | 公開（公告）日： | 2017-10-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 韋立毅;邱晉;武晨茜;繆閆蕊玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川仲測質(zhì)量技術(shù)檢測有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市蘭鋒知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)44419 | 代理人： | 曹明蘭 |
| 地址： | 610213 四川省成都市天府新區(qū)華陽街*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 檢測 麥角 試劑盒 方法 | ||
1.一種檢測麥角菌的LAMP方法，所述方法用于對食品中的麥角菌進(jìn)行鑒定，其包括以下步驟：
(1)向待測樣品中加入CTAB抽提緩沖液，按照常規(guī)CTAB法提取DNA；
(2)在PCR管中制備LAMP反應(yīng)體系，其包括0.2μmol/μl的外引物F3 1μl、0.2μmol/μl的外引物B3 1μl、1.2μmol/μl的內(nèi)引物FIP 1μl、1.2μmol/μl的內(nèi)引物BIP 1μl、反應(yīng)緩沖液2.5μl、8U/μl的Bst DNA聚合酶1μl、模板DNA 2μl，加水補(bǔ)充至25μl，并以麥角菌基因組DNA作為陽性對照，以100mM Tris-HCl pH 8.0和50mM EDTA作為陰性對照，
其中所述引物如下所示：
外引物F3：CGGACACTCAAGATCGACC(SEQ ID NO:1)
外引物B3：CGATATCGGGCCTTGTGAAT(SEQ ID NO:2)
內(nèi)引物FIP：TGGGGTTCGTTTCGGCTTGAA-GACAAGCGTGCTTGACCAAT(SEQ ID NO:3)
內(nèi)引物BIP：GAGAATCTGAGGCCGGCTACTG-TCCTTCCTATGCCCTGCT(SEQ ID NO:4)；
(3)將步驟(2)中的PCR管于63℃恒溫反應(yīng)60min；
(4)分析判斷反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)果：在(3)中所得反應(yīng)產(chǎn)物中加入1μl核酸染料SYBR Green I，如反應(yīng)液顏色為橙色，表示結(jié)果為陰性，食品中不含麥角菌，如反應(yīng)液顏色為綠色，表示結(jié)果為陽性。
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