[發(fā)明專利]一種大螟對氯蟲苯甲酰胺抗性的分子檢測方法及其專用引物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610266634.0
• 申請日: 2016-04-27
• 公開（公告）號: CN105734154B
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發(fā)明（設計）人: 魯艷輝;鐘列權;王國榮;張發(fā)成;鄭許松;呂仲賢
• 申請（專利權）人: 浙江省農業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

1.特異性引物組合物在制備檢測大螟對氯蟲苯甲酰胺抗性試劑上的用途，其中所述的引物組合物由下列序列組成：

引物1：5’-TGTTGGATGTCGCTGAGGG-3’；

引物2：5’-TGTTGGATGTCGCTGAGGA-3’；

引物3：5’-GAAGAAGTTGAACGCGATCA-3’；

其中，引物1為敏感型專用上游引物，引物2為抗性專用上游引物，引物3為敏感型/抗性專用下游引物；引物1的3’末端第1位核苷酸與突變前的核苷酸一致，引物2的3’末端第1位核苷酸與突變后的核苷酸一致；此外，為了增加等位基因特異性PCR方法的特異性，引物1和引物2的3’末端第3位和第4位核苷酸引入了錯配堿基G和A；其中，引物1和引物3為敏感引物對，引物2和引物3為抗性引物對。

2.根據權利要求1所述的用途，檢測大螟魚尼丁受體基因是否發(fā)生了G4924E突變，所述魚尼丁受體基因的G4924E突變指的是魚尼丁受體基因的開放閱讀框從5’末端第14771位核苷酸由G突變?yōu)锳，從而檢測大螟對氯蟲苯甲酰胺的抗性。

3.一種檢測大螟魚尼丁受體G4924E突變的基因型的方法，包括以下步驟：

以待檢測大螟基因組DNA為模板，分別采用在權利要求1中所述的敏感引物對和抗性引物對進行PCR擴增，獲得以下結果：如果采用敏感引物對時擴增得到了140bp的擴增產物而同時采用抗性引物對沒有擴增到140bp的擴增產物，則待檢測大螟為GG基因型，即敏感基因型；如果采用敏感引物對時沒有擴增得到140bp的擴增產物而同時采用抗性引物對擴增得到了140bp的擴增產物，則待檢測大螟為AA基因型，即抗性基因型；如果采用敏感引物對時擴增得到了140bp的擴增產物而同時采用抗性引物對也擴增得到了140bp的擴增產物，則待檢測大螟為GA基因型，即敏感和抗性雜合基因型。