[發明專利]一種同時或分別檢測細胞溶酶體內硫化氫和次氯酸的熒光探針及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201610263094.0
• 申請日: 2016-04-26
• 公開（公告）號: CN105777768B
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 林偉英;任明光;鄧貝貝;周凱
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: C07D491/107
• 分類號: C07D491/107;C09K11/06;G01N21/64;G01N21/78
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所37218
• 代理人: 賈波

1.一種同時或分別檢測細胞溶酶體內硫化氫和次氯酸的熒光探針，其特征在于，探針的分子式為C₄₄H₄₃N₉O₇，其結構式如式（Ⅰ）所示：

。

2.一種權利要求1所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

1）將化合物FP-1與水合肼在乙醇中，氮氣保護，加熱回流反應，反應完全后分離提純得到化合物FP-2； 所述化合物FP-1結構式如下：

；所述化合物FP-2結構式如下：

；

2） 將所得化合物FP-2溶于DMF中，依次加入1-羥基苯并三唑和碳化二亞胺，室溫下反應 30 min后加入化合物FP-3，在氮氣保護下，室溫下反應，反應完全后分離提純得到化合物FP-4；所述化合物FP-3結構式如下：

；所述化合物FP-4的結構式如下：

；

3）將所得化合物FP-4溶于三氯甲烷中，冰水浴條件下攪拌，加入三乙胺，然后將溴乙酰溴溶于少量三氯甲烷中，并將其緩慢滴加，滴加完畢后，室溫反應8小時，反應完全后，分離提純可得到化合物FP-5；所述化合物FP-5的結構式如下：

；

4）將所得化合物FP-5溶于DMF中，在冰水浴下加入碳酸鉀和嗎啉，微量碘化鉀，在室溫下反應4h，反應完全后分離提純得到化合物FP-6；所述化合物FP-6的結構式如下：

；

5）將所得化合物FP-6溶于DMF中，加入NaN₃，氮氣保護，100℃加熱反應過夜，反應完全后，分離提純即得到目標探針化合物Lyso-HS-HA。

3.根據權利要求2所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述步驟1）中加熱回流反應時間為1小時；所述分離提純方法為：硅膠柱色譜分離，洗脫劑配比為二氯甲烷：甲醇=10:1。

4.根據權利要求2所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述步驟2）中室溫反應時間為4小時；所述分離提純方法為：乙酸乙酯萃取2次，水洗3-4次，無水硫酸鈉干燥，硅膠柱色譜分離，洗脫劑配比為二氯甲烷：甲醇=20:1。

5.根據權利要求2所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述步驟3）中分離提純方法為：硅膠柱色譜分離，洗脫劑配比為二氯甲烷：甲醇=20:1。

6.根據權利要求2所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述步驟4）中分離提純方法為：乙酸乙酯萃取2次，水洗3-4次，無水硫酸鈉干燥，硅膠柱色譜分離，洗脫劑配比為二氯甲烷：甲醇=30:1。

7.根據權利要求2所述的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述步驟5）中分離提純方法為：乙酸乙酯萃取2次，水洗3-4次，無水硫酸鈉干燥，硅膠柱色譜分離，洗脫劑配比為二氯甲烷：甲醇=30:1。

8.一種權利要求1所述的同時或分別檢測細胞溶酶體內硫化氫和次氯酸的熒光探針的應用，其特征在于，所述熒光探針可以應用于水環境中和細胞溶酶體中H₂S、HClO和H₂S/HClO的同時或分別傳感檢測；所述的傳感檢測包含熒光檢測，目視定性檢測，細胞成像檢測。