[發明專利]一種豬細環病毒2型環介導等溫擴增試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201610259446.5
• 申請日: 2016-04-25
• 公開（公告）號: CN105779656B
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 陳忠偉;何穎;段群棚;周英寧;趙武;秦毅斌;盧冰霞;李斌;梁家幸;楊思儀;蔣冬福;蘇乾蓮
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 44214 廣州市紅荔專利代理有限公司
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

本發明公開一種豬細環病毒2型環介導等溫擴增試劑盒及其應用，該試劑盒包括LAMP引物、2×反應緩沖液、Bst DNA聚合酶、熒光目視檢測試劑、超純水和豬細環病毒2型DNA模板，所述的LAMP引物包括外引物F3與B3、內引物FIP與BIP和環引物LF與LB。其應用包括使用該試劑盒檢測豬細環病毒2型病變組織樣品和豬細環病毒2型病原定性研究。特異性檢測和敏感性檢測證實，本發明提供的LAMP檢測方法可實時監測反應并且定量檢測出豬細環病毒2型的拷貝數，快速準確的獲得檢測結果，為簡便、快速和可靠的檢測豬細環病毒2型帶來便利。

技術領域

本發明涉及微生物檢測技術領域，具體說是涉及一種快速、可視化并且可實時定量檢測豬細環病毒2型的環介導等溫擴增試劑盒及其應用。

背景技術

豬細環病毒(Torque teno sus virus, TTSuV)是一種無囊膜，單股負鏈的環形DNA 病毒，根據其核苷酸序列差異，可將TTSuV分為兩個亞型即 TTSuV1和 TTSuV2，其中TTSuV1被歸為 Iota-torquevirus屬，TTSuV2 則被歸為 Kappatorque-virus屬 。細環病毒由日本學者 Nishizawa 等于 1997 年首次在輸血后的肝炎患者的血清中發現，其宿主范圍非常廣泛，目前此病毒已廣泛感染非人靈長類、家養及野生動物以及人類。細環病毒在人群中感染率較高，根據各國對不同人群TTV 感染的流行病學調查，發現人群的TTV DNA 陽性率一般在10%以上。豬細環病毒方面，日本、美國、泰國、韓國、法國、西班牙、加拿大等諸多國家的豬群中也廣泛存在豬細環病毒（TTSuV），感染率高達24%～100%不等。不同地區間TTSuV毒株之間核酸序列的同源性可達到86～100%。因為 TTSuV2 廣泛存在于豬群體內，其具體的生物學意義尚未明確。迄今為止，人們仍不清楚 TTSuV2的致病性，目前研究只了解到 TTSuV2與豬繁殖呼吸綜合征病毒( PRRSV) 、豬圓環病毒( PCV) 等病毒存在某種協同作用，當發生混合感染時會加重斷奶仔豬多系統衰竭綜合征( PMWS) 和豬皮炎腎病綜合癥的癥狀。

有臨床資料顯示，TTSuV2含量與豬圓環病毒2型（PCV2）等疾病嚴重程度存在相關性，故測定TTSuV2的病毒載量具有重要意義。由于目前缺乏相關血清學檢測商品試劑，故目前主要使用常規 PCR、熒光定量 PCR方法和套式PCR等技術手段來檢測TTSuV2。但這些技術在運用上尚存在著一些不足并且對硬件方面有較高要求，在結果判定上還需進行瓊脂糖凝膠電泳，容易造成實驗室污染導致出現假陽性結果，用時也較長，不適合基層和現場檢測。因此建立一種簡單且靈敏的TTSuV2檢測方法，具有一定的臨床意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種為基層簡便、快捷準確地檢測豬細環病毒2型的方法，公開一種快速、實時定量的檢測豬細環病毒2型環介導等溫擴增試劑盒。為實現本發明目的所使用的技術方案為：一種豬細環病毒2型環介導等溫擴增試劑盒，該試劑盒包括LAMP引物、2×反應緩沖液、Bst DNA聚合酶、熒光目視檢測試劑、超純水和豬細環病毒2型DNA模板，所述的LAMP引物包括外引物F3（SEQ ID NO：1）與B3（SEQ ID NO：2）、內引物FIP（SEQ ID NO：3）與BIP（SEQ ID NO：4）和環引物LF（SEQ ID NO：5）與LB（SEQ ID NO：6）；

其中引物的序列分別為：

F3 AAGTGCGCAGACGAATGG

B3 GGGTTTTTACAGCCGCAGAA

FIP ACTCCGCTCTCAGGAGCTCCTTTATGCCGCTGGTGGTAG

BIP GCGGTAATCCAGCGGAACCG TAATCCGTGCGCGCAGTA

LF ACACTCAGCTCTGTTCGTGT

LB CCCCCCCTCCATGGAAGAA