[發(fā)明專利]重組核酸片段RecCR010375及其檢測(cè)引物與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610258717.5
• 申請(qǐng)日: 2016-04-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107304451B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周發(fā)松;喻輝輝;張學(xué)堂;邱樹(shù)青;張龍雨;雷昉;姚玥;李旭;潘麗;李菁;韋懿;陳光;何予卿;楊毅;張啟發(fā)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)種子集團(tuán)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種具有稻瘟病抗性的水稻植株的選育方法，其特征在于，步驟如下：

1）以‘中種恢629’為輪回親本，‘華130B’為供體親本進(jìn)行雜交，將輪回親本與供體植物進(jìn)行雜交，將所得到的雜交種與輪回親本進(jìn)行回交，獲得回交一代，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17和負(fù)向選擇標(biāo)記PiC11S122、PiC11S166對(duì)其進(jìn)行抗稻瘟病基因組片段的單側(cè)同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇；

2）選擇背景回復(fù)值超過(guò)75%的重組單株與輪回親本再次進(jìn)行回交，獲得回交二代，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，選擇含有抗稻瘟病基因組片段的重組單株，然后利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇；

3）選擇背景回復(fù)值超過(guò)87.5%的重組單株與輪回親本又一次進(jìn)行回交，獲得回交三代，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17和負(fù)向標(biāo)記PiC11S122、PiC11S166對(duì)其進(jìn)行抗稻瘟病基因組片段的另一側(cè)同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇；

4）選擇導(dǎo)入片段小，且背景回復(fù)值超過(guò)93.75%的重組單株，將選中的重組單株自交一次，獲得自交種，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，并利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇，最終獲得含抗稻瘟病基因組重組核酸片段純合且背景回復(fù)值超過(guò)99%的水稻植株；

擴(kuò)增標(biāo)記PiC11ID17的引物對(duì)為：

正向引物：5’-GTACTGGAGGATCAGGACTGG-3’，

反向引物：5’-CTGTTGCCTTGTGACTGTGAG-3’；

擴(kuò)增標(biāo)記PiC11S122的引物對(duì)為：

正向引物：5’-TACGACCGTGACATGTCCTT-3’，

反向引物：5’-ATTAACCACCATGCTCACCA-3’；以及

擴(kuò)增標(biāo)記PiC11S166的引物對(duì)為：

正向引物：5’-TTAGCCCCTCTCTCTCTCCA-3’，

反向引物：5’-GCCAGATCTAGCAGAGGTGA-3’；

其中，步驟1）和2）中使用的水稻全基因組育種芯片為RICE6K；

步驟3）和4）中使用的水稻全基因組育種芯片為RICE60K。