[發(fā)明專利]一種角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610257663.0
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105684879A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡偉
• 申請（專利權(quán)）人: 象山旭文海藻開發(fā)有限公司
• 主分類號: A01G33/00
• 分類號: A01G33/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)野外采樣

角叉菜主要棲生于高潮帶至低潮帶的礁石上，采樣時，首先挑選健康顏色鮮艷的藻 體，然后將藻體置于光下,通過觀察成體藻的形態(tài)特征而確定藻體的基本繁殖方式，然后 無水低溫帶回實驗室；

(2)藻體處理

帶回實驗室的藻體，應(yīng)盡快處理，在倒置顯微鏡下，使用無菌刀片取其藻體的成熟 部分，然后用無菌海水沖洗數(shù)次，無菌棉球擦拭去除表面附生生物，最后將藻體置于無菌 培養(yǎng)皿即1％VSE無菌海水中，在10-15℃,10-100umol/m²s環(huán)境下培養(yǎng)；

(3)孢子釋放

50-70分鐘后，在倒置顯微鏡下觀察藻體孢子放散情況，觀察培養(yǎng)液中紅色圓形小球 來表征藻體孢子的放散；

(4)孢子收集

孢子放散后立即收集，使用拉絲后的移液器，在倒置顯微鏡下吸取孢子，并置于無 菌的培養(yǎng)板即1％VSE無菌海水中，重復(fù)多次上述步驟，直至達(dá)到期望的孢子濃度在 10-15℃,10-200μmol/m²s環(huán)境下培養(yǎng)，每周更換一次營養(yǎng)液；

(5)藻苗懸浮培養(yǎng)

待藻體長到至少1mm，用無菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗，此過程應(yīng)該快速，避免藻 體污染，使用125-250um/m目數(shù)的篩網(wǎng)過濾，將藻苗轉(zhuǎn)至無菌三角瓶中，三角瓶中為1％VSE 無菌海水；三角瓶密封通氣培養(yǎng)，氣流大小保證藻體可緩慢滾動，又不至于將藻體吹至瓶 壁上，每周更換一次培養(yǎng)液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(1)中將藻體 置于光下,通過觀察成體藻的形態(tài)特征，確定藻體屬于四分孢子體或者是雌配子體，所述 四分孢子體即藻體內(nèi)有圓形的囊泡，所述雌配子體即藻體上有附生的囊體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(3)中觀察培 養(yǎng)液中紅色圓形小球來表征藻體孢子的放散，如若出現(xiàn)藻體破裂，大量紅色圓形小球從藻 體中涌出，說明藻體已經(jīng)開始釋放孢子；如果未出現(xiàn)此現(xiàn)象，每隔一小時進(jìn)行檢測。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)中所述移 液器需要經(jīng)過高溫拉絲，使孔徑達(dá)到單個孢子通過。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)中孢子培 養(yǎng)容器為12或24孔的培養(yǎng)板。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(5)中三角瓶 使用空氣過濾器密封通氣培養(yǎng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角叉菜懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(5)中的培養(yǎng) 條件如下：20℃，1％VSE海水，無菌，28ppt，200-250μmol/m²s。