[發明專利]用于轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分精準定量檢測的引物探針、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201610257609.6
• 申請日: 2016-04-25
• 公開（公告）號: CN107312819B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 陳穎;黃文勝;鄧婷婷;葛毅強;周杰;蘆云
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 孫倩倩

本發明涉及用于轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的精準定量檢測的寡核苷酸引物探針，包含所述引物探針的試劑盒。本發明還涉及用于定量檢測轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的數字PCR檢測方法，所述方法包括使用針對轉基因大米科豐6號品系特異性基因的特異性寡核苷酸引物和熒光標記探針。本發明還涉及針對轉基因大米品系特異性基因的特異性寡核苷酸引物和熒光探針在定量檢測轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分中的應用。使用本發明的數字PCR檢測方法，能夠精準靈敏地測定樣品中轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分含量，靈敏度可以達到1 copy/μL。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體而言，本發明涉及用于轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分檢測的寡核苷酸引物和熒光標記探針，包含所述引物探針的試劑盒，用于測定轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的數字PCR檢測方法以及樣品中轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的特異性寡核苷酸引物和探針在檢測轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分中的應用。

背景技術

隨著轉基因產品的大量研究及其在日常生活中的廣泛應用，轉基因產品對人類健康以及生存環境所帶來的安全性問題已經引起世人的廣泛關注及爭論。因此，世界各國在積極研究轉基因技術的同時，也對各種轉基因食品的檢測分析方法進行了大量研究。但由于轉基因種類多，數量大，尤其是很多轉基因食品經過深加工和各種條件處理保存后，轉基因成分大量降解，檢測難度加大。因此，需要根據科學技術的發展不斷更新和發展各種轉基因食品的檢測技術，以加強轉基因食品監督、監測和管理，減少其商品化可能帶來的風險，同時保護公眾健康、保護廣大消費者知情權和選擇權。

目前，世界各國出于經濟、衛生、環保等各種目的紛紛對轉基因生物及其產品加強管理和檢測。包括中國在內的50個左右國家和地區相繼頒布并實行了“轉基因標識制度”，對轉基因生物及其加工產品進行標識和管理。近年來，隨著各國有關GMO（GeneticallyModified organism）標簽法的建立和不斷完善，對食品中的GMO含量下限已有所規定。很多國家不但要求對轉基因食品進行定性檢測，還需要對食品中的GMO含量進行定量檢測，以便標識,其標識的閾值一般在0.9%–5%之間。而建立轉基因產品的檢測技術標準尤其是精準定量檢測技術是實施轉基因產品標識的技術前提。因此，轉基因成分的精準定量技術將隨著全世界標識制度的完善和發展日趨重要。

數字PCR(digital polymerase chain reaction，dPCR)作為更精確和更靈敏的DNA定量檢測新技術，實現了單分子DNA的絕對定量。dPCR是在普通數字PCR基礎上建立起來的DNA絕對定量方法，解決了普通數字PCR所用的標準曲線對測量結果產生影響等問題，并可減少其帶來的基體效應。dPCR具有測量獨立性與無需任何校準物的特點。

我國轉基因水稻研究處于國際領先水平，dPCR技術的出現為大米轉基因成分定量檢測開辟了新的途徑，使得食品中大米轉基因成分的定量分析與溯源成為可能。利用dPCR技術提升定量檢測方法的準確性與實用價值將成為轉基因精準定量檢測技術發展的一個重要方向。

發明內容

本發明的一個目的在于，提供精準定量檢測轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的特異性寡核苷酸引物和熒光標記探針。

本發明的另一個目的在于，提供精準定量測定轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的數字PCR檢測試劑盒。

本發明的另一個目的在于，提供精準定量測定轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的數字PCR檢測方法。

本發明的還一個目的在于，提供轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分的特異性寡核苷酸引物和探針在精準定量檢測食品中轉基因大米科豐6號品系特異性基因成分中的應用。

針對上述發明目的，本發明提供以下技術方案：