[發明專利]一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙及其制備方法

在審

• 申請號: 201610257031.4
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105785013A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 盧連偉
• 申請（專利權）人: 盧連偉
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;G01N33/558;G01N33/53
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 52110
• 代理人: 管寶偉

1.一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙，其特征在于，所述試紙包括底板、樣品吸收墊、膠體金結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊；試紙制備時由樣品吸收墊、膠體金結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊依次搭接粘貼在底板上；所述膠體金結合墊上包被有膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體，和膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體；所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線1，檢測線2和質控線，所述檢測線1包被有膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體，所述檢測線2包被有膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體；所述質控線包被有羊抗兔IgG抗體。

2.如權利要求1所述的一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙，其特征在于，所述樣品吸收墊經處理液處理，所述處理液為Tris-Hcl溶液，其中還包含1.7-2.9％的牛血清白蛋白、1.2-2.6％的聚乙烯吡咯烷酮、1-2.4％的海藻糖，pH為7.5-9.5。

3.如權利要求1所述的一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙，其特征在于，所述底板為PVC膠板。

4.如權利要求1所述的一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙，其特征在于，所述膠體金溶液的制備方法為：將質量濃度為0.01％的氯金酸溶液100ml，加熱至沸騰后迅速加入1.5ml濃度為1％的檸檬酸三鈉水溶液，加熱煮沸15min，冷卻后以蒸餾水恢復到原體積，得到膠體金溶液。

5.如權利要求1所述的一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙，其特征在于，所述的膠體金標記抗體的制備方法為：將制備好的膠體金溶液取出5mL的量兩份，取抗CA19-9單克隆抗體和幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體各30μg分別加入上述兩份的膠體金溶液中，攪拌30min使其混合，再分別加入質量濃度為6％的胎牛血清，其加入量為使總溶液最終濃度為1.1％，先以500r/min的轉速低速離心5min，再以2500r/min的轉速高速離心15min，取上清液，5℃下保存，即得到純化的膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體和膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體。

6.如權利要求1所述的一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙，其特征在于，所述硝酸纖維素膜的包被方法為：將硝酸纖維素膜粘在底板上，用劃膜儀在其上特定位置上劃出檢測線1，檢測線2和質控線的位置，檢測線1上噴涂包被有膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體，檢測線2上噴涂包被有膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體，質控線上噴涂包被有羊抗兔IgG抗體。

7.如權利要求1所述的一種輔助檢測胰腺癌的膠體金免疫層析試紙的制備方法為：

步驟一：樣品吸收墊經處理液處理，所述處理液為Tris-Hcl溶液，其中還包含1.7-2.9％的牛血清白蛋白、1.2-2.6％的聚乙烯吡咯烷酮、1-2.4％的海藻糖，pH為7.5-9.5。

步驟二：膠體金結合墊制備方法：

(1)膠體金溶液的制備方法為：將質量濃度為0.01％的氯金酸溶液100ml，加熱至沸騰后迅速加入1.5ml濃度為1％的檸檬酸三鈉水溶液，加熱煮沸15min，冷卻后以蒸餾水恢復到原體積，得到膠體金溶液，備用；

(2)膠體金標記抗體的制備方法為：將(1)制備好的膠體金溶液取出5mL的量兩份，取抗CA19-9單克隆抗體和幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體各30μg分別加入上述兩份的膠體金溶液中，攪拌30min使其混合，再分別加入質量濃度為6％的胎牛血清，其加入量為使總溶液最終濃度為1.1％，先以500r/min的轉速低速離心5min，再以2500r/min的轉速高速離心15min，取上清液，5℃下保存，即得到純化的膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體和膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體，備用；

(3)將(2)中制備好的純化的膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體和膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體分別均勻噴涂于玻璃纖維膜上，冷凍干燥，即為膠體金結合墊，備用；

步驟三：硝酸纖維素膜的包被方法為：將硝酸纖維素膜粘在底板上，用劃膜儀在其上特定位置上劃出檢測線1，檢測線2和質控線的位置，檢測線1上噴涂包被有膠體金標記的抗CA19-9單克隆抗體，檢測線2上噴涂包被有膠體金標記的幽門螺旋桿菌外膜血凝素抗原的單克隆抗體，質控線上噴涂包被有羊抗兔IgG抗體，備用；

步驟四：試紙制備：將樣品吸收墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次相互疊加粘貼在底板上，35-40℃下干燥，用斬切機切成5mm寬的試紙條，然后進行包封儲存。