[發(fā)明專利]一種鮑特菌選擇性培養(yǎng)基及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610255456.1
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105779561A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華春珍;李建平;尚世強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 葉志堅(jiān)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，提供一種鮑特菌選擇性培養(yǎng)基及其應(yīng) 用。

背景技術(shù)

鮑特菌主要包括百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌，是兒科領(lǐng)域非常重 要的呼吸道感染病原菌，百日咳鮑特菌引起的疾病稱為百日咳，屬于國家 法定的乙類傳染病。副百日咳鮑特菌感染引起的疾病為百日咳綜合征，不 屬于傳染病范疇。近年來，百日咳在很多發(fā)達(dá)國家的發(fā)病率大幅度上升， 成為全球兒童感染領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。我國兒童基數(shù)龐大，兒科百日咳樣咳 嗽的患兒數(shù)量大，季節(jié)性明顯，但因檢測手段有限，細(xì)菌培養(yǎng)困難，導(dǎo)致 臨床上百日咳的病原診斷非常困難，很多可能的百日咳患兒被籠統(tǒng)診斷為 百日咳綜合征，嚴(yán)重影響百日咳患兒的治療和防控。

細(xì)菌培養(yǎng)是感染性疾病病原診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，目前國內(nèi)無該培養(yǎng)該菌的 培養(yǎng)基成品。國外有可用于百日咳桿菌培養(yǎng)的碳瓊脂培養(yǎng)基干粉(OXOID Company,England)，成分含牛肉浸粉、蛋白胨、淀粉、細(xì)菌學(xué)木炭、氯化 鈉、煙酸和瓊脂粉，使用的選擇性鮑特菌培養(yǎng)基添加物為頭孢氨芐，加入 5％脫纖維馬血可配制成鮑特菌選擇性培養(yǎng)皿。但根據(jù)該配方配制的培養(yǎng)基 因?qū)ζ渌?xì)菌的抑制效果不理想，導(dǎo)致百日咳鮑特菌等細(xì)菌的分離率很低。 而且，上述碳瓊脂培養(yǎng)基干粉和添加物在中國未經(jīng)注冊，因此在中國境內(nèi) 的醫(yī)院無法合規(guī)采購和使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是針對國內(nèi)目前尚無鮑特菌選擇培養(yǎng)基、且國外現(xiàn) 有選擇性鮑特菌培養(yǎng)基配方對百日咳桿菌等鮑特菌選擇性欠佳的現(xiàn)狀，提 供一種培養(yǎng)效率較高的鮑特菌選擇性培養(yǎng)基平皿成品。

本發(fā)明鮑特菌選擇性培養(yǎng)基配方按照質(zhì)量百分比計(jì)算，包括：含蒸餾 水85.7～87﹪、脫纖維羊血8.6～9.5﹪、瓊脂粉1.0～1.2﹪、牛肉浸粉0.85～ 0.95﹪、蛋白胨0.85～0.95﹪、淀粉0.85～0.95﹪、氯化鈉0.43～0.48﹪、 細(xì)菌學(xué)木炭0.34～0.39﹪、煙酸7.5×10^-5～9.5×10^-5﹪和萬古霉素1×10^-3～ 2×10^-3﹪。

本發(fā)明的另一個目的是上述鮑特菌選擇性培養(yǎng)基在兒童呼吸道感染病 原檢測試劑盒中的應(yīng)用，優(yōu)選在百日咳檢測試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果如下：

使用本發(fā)明的選擇性培養(yǎng)基平皿能有效培養(yǎng)出百日咳鮑特菌、副百日 咳鮑特菌、支氣管敗血性鮑特菌等鮑特菌屬的所有細(xì)菌，特別是在百日咳 的診斷中起金標(biāo)準(zhǔn)作用。

附圖說明

圖1為百日咳患兒馮某同時采集的鼻咽拭子接種在現(xiàn)有對比鮑特菌選 擇性培養(yǎng)基和本發(fā)明培養(yǎng)基上百日咳鮑特菌的生長情況比較。

圖2為百日咳患兒蔣某同時采集的鼻咽拭子接種在現(xiàn)有對比鮑特菌選 擇性培養(yǎng)基和本發(fā)明培養(yǎng)基上百日咳鮑特菌的生長情況比較。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的分析。

以下實(shí)施例所采用的脫纖維羊血購買自杭州康裕貿(mào)易有限公司，細(xì)菌 學(xué)瓊脂粉和牛肉浸粉為青島海博生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，蛋白胨購自英國 OXOID公司，馬鈴薯淀粉自制，細(xì)菌學(xué)木炭為定制木炭自行磨碎成粉末， 氯化鈉為市售化學(xué)純產(chǎn)品，煙酸為北京四環(huán)生物制藥有限公司產(chǎn)品，萬古 霉素為禮來公司產(chǎn)品；現(xiàn)有對比鮑特菌選擇性培養(yǎng)基是國外配方，成分包 括碳瓊脂培養(yǎng)基干粉(OXOIDCompany,England)、添加物頭孢氨芐、5％ 脫纖維馬血，其中這里所指代的碳瓊脂培養(yǎng)基干粉成分含牛肉浸粉、蛋白 胨、淀粉、細(xì)菌學(xué)木炭、氯化鈉、煙酸和瓊脂粉。

實(shí)施例1-1：鮑特菌選擇性培養(yǎng)基平皿的配制(以配制1000ml為例)

(一)碳粉培養(yǎng)基基礎(chǔ)懸液的準(zhǔn)備：將瓊脂粉10～12g、牛肉浸粉8.5～ 9.5g、蛋白胨8.5～9.5g、馬鈴薯淀粉8.5～9.5g、氯化鈉4.3～4.8g、細(xì)菌學(xué) 木炭3.4～3.9g、煙酸0.00075～0.00095g混合，加入857～870g水混合搖 勻。

(二)培養(yǎng)基平皿的配制

步驟(1)、將上述配好的混懸液置于121℃高溫、0.11mpa高壓滅菌 15分鐘，然后涼至50℃；

步驟(2)、在無菌操作環(huán)境，將100ml脫纖維羊血(100g)緩慢加入 步驟(1)制備得到的培養(yǎng)基中，輕輕混勻；