[發明專利]一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法

有效

• 申請號: 201610255254.7
• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN105907387B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 光善儀;徐曼曼;趙剛;徐洪耀
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07D491/107;G01N21/64
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司31001
• 代理人: 翁若瑩,王婧

技術領域

本發明屬于熒光探針材料檢測方法領域，特別涉及一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法。

背景技術

亞錫離子應用于預防齲齒的歷史由來已久，作為人體生理活動所必需的微量元素，大量證據表明Sn²⁺除了能有效抑制癌細胞的生成，還可促進蛋白質和核酸的合成，促進身體的生長發育，還參與組成多種酶以及黃素酶的生物反應，從而增強體內環境的穩定性。亞錫的缺乏可能會導致生長不良和聽力喪失，但亞錫過多積累造成對鋅離子代謝干擾，會影響呼吸道和消化系統。

亞錫離子具有很強的還原性，SnCl₂是人們熟悉的還原劑。它能把許多金屬離子還原成低氧化態，甚至還原到金屬。亞錫離子還有很強的配位性，在(合成化學，2006)報道了1-(2-吡啶偶氮)-2-萘(PAN)與亞錫離子能很好的絡合形成新的混合膠束具有很好的熒光性能，從而達到檢測亞錫的目的，利用熒光光譜法檢測線能達到2ng·mg^-1。

目前，人們用來檢測Sn²⁺的方法有火焰原子吸收光譜法、電位膜傳感法及紫外/可見分光光度法，相比于這些方法，熒光分析法具有操作簡單，靈敏度高，選擇性好的優勢。(Analyst,2014,139,5223)報道了設計合成了兩種用于真核和原核細胞的Sn²⁺熒光探針，其檢測線分別達到5.7×10^-7和4.6×10^-7。申請人申請的中國專利201510869087.0“檢測汞離子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用”，在乙腈溶液中，使用熒光光譜法，在激發波長為560nm，檢測發射波長為580nm，檢測汞離子的濃度在0.89-60μM的范圍達到一個很好地線性，采用熒光探針法檢測汞離子溶液，可實現對汞離子的實時和快速的檢測，在環境檢測方面有較好的應用前景。

羅丹明及其衍生物作為開/關形式的熒光探針，具有較高的熒光量子產率，較大的摩爾消光系數，在可見光區具有較長的發射和吸收波長。螺旋狀羅丹明內酰胺化合物本身具有一定的結構張力，在與重金屬粒子結合后，內酰胺氮原子的質子化將導致氮原子電荷密度減少，從而引發螺旋中心C-N鍵的開裂，同時，斷鍵后原本富電子的螺旋環將進行電荷重排，形成更穩定的剛性平面大π鍵結構，從而產生熒光變化和顏色變化。和不同金屬離子作用后，所形成的作用不同，羅丹明衍生物會發生熒光和顏色的變化也各不相同。因而羅丹明及其衍生物在作為探針檢測重金屬離子方面具有很大的發展前景。熒光分子探針具有靈敏度高，專一性強，無損傷快速準確等特點在檢測生物體內金屬方面顯示出了獨特的優勢，并廣泛應用于金屬離子參與的生物學研究(Inorg.Chim.Acta,2012,381,2-14)。羅丹明B又稱玫瑰紅B，羅丹明基熒光探針具有良好的熒光性能和較小的細胞毒性，廣泛應用于生物體內離子及小分子的檢測，生物大分子的分析和檢測以及復雜生物體系的研究。該類熒光探針在識別前后熒光呈現從無到有的增強型響應，具有很高的靈敏度，通過對識別基團的精心選擇和設計該類探針表現出良好的選擇性和抗干擾性(Chem.Rev.2012.112.1910-1956)。令人遺憾是目前很少見到是識別亞錫離子的羅丹明基熒光探針的報道。綜上所述，開發出了一種可檢測亞錫離子的羅丹明基熒光探針對于研究亞錫離子的生物活性和藥理作用具有重要的應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法。

為了達到上述目的，本發明提供了一種羅丹明類熒光探針在檢測亞錫離子含量中的應用。

優選地，所述的羅丹明類熒光探針的結構式為：

本發明還提供了一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，包括：

步驟1：配制羅丹明類熒光探針溶液；

步驟2：配制亞錫離子溶液；

步驟3：配制pH＝6.0～7.0的NaOH/NaH₂PO₄緩沖溶液；

步驟4：分別將步驟1得到的羅丹明類熒光探針溶液加入到步驟3得到的NaOH/NaH₂PO₄緩沖溶液中得到多個含有熒光探針的緩沖體系，分別加入不同體積的步驟2所得的亞錫離子溶液，得到不同濃度的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，以亞錫離子的濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標作圖，得到線性關系曲線；