[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于檢測(cè)人源性axin2基因表達(dá)水平的引物探針組合及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610253227.6
• 申請(qǐng)日: 2016-04-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105755142A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣明;于麗華;郭佳;徐月
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 同濟(jì)大學(xué)蘇州研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明屬基因技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)人源性Axin2基因表達(dá)水平的引物探針組合。

背景技術(shù)Axin2是Axin家族的兩個(gè)同源蛋白之一，是一種普遍存在于生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)，其作為一種多功能的支架蛋白參與了多種生理病理過(guò)程，涉及到胚胎發(fā)育、細(xì)胞凋亡、糖原代謝等過(guò)程，在Wnt信號(hào)通路、應(yīng)激反應(yīng)蛋白激酶（SAPK）信號(hào)通路、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGFβ）信號(hào)通路和胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中扮演重要角色，在腫瘤形成、胚胎發(fā)育等過(guò)程中具有重要的生物學(xué)功能。通過(guò)對(duì)Axin2的研究可研究腫瘤性疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制。Axin是Wnt信號(hào)通路的抑制因子，Wnt信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增值、分化及運(yùn)動(dòng)。Axin對(duì)癌癥的發(fā)生發(fā)展具有重要作用，研究發(fā)現(xiàn)原癌細(xì)胞中存在A(yíng)xin基因，并且在癌細(xì)胞中引入野生型Axin基因可導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡。對(duì)結(jié)直腸癌的研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌中可存在A(yíng)xin2突變基因，最主要的突變形式為羧基端缺失突變(mutant-typeAxin2,mtAxin2)，突變的Axin2會(huì)干擾β-catenin的降解,引起β-catenin在核內(nèi)的積聚進(jìn)而激活Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。此外，Axin可以促進(jìn)抑癌基因p53產(chǎn)物的磷酸化，進(jìn)而提高抑癌基因p53基因的轉(zhuǎn)錄活性和細(xì)胞凋亡；并且在高表達(dá)Axin的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物胸腺和脾內(nèi)表現(xiàn)高水平的細(xì)胞凋亡。Axin在Wnt通路中的作用相對(duì)明確，但在SAPK/JNK和TGFβ信號(hào)通路中的作用研究還較少，對(duì)Axin在細(xì)胞分化、增殖、凋亡及腫瘤發(fā)生發(fā)展等過(guò)程中的作用仍有很多未知之處，需要進(jìn)一步研究。

對(duì)Axin的研究手段除采用蛋白質(zhì)組學(xué)方面的研究包括免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western印跡雜交研究外，分子生物學(xué)技術(shù)亦是很重要的研究手段，熒光定量PCR方法是簡(jiǎn)便快捷的研究方法，從基因表達(dá)方面對(duì)Axin的表達(dá)水平進(jìn)行定量研究，可很好輔助Axin的功能研究，也可通過(guò)對(duì)Axin基因表達(dá)水平的研究探索腫瘤靶向藥物的療效。目前尚未有專(zhuān)門(mén)針對(duì)人源性Axin2基因表達(dá)水平研究的高特異性引物探針檢測(cè)系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物探針系統(tǒng)采用熒光定量PCR方法檢測(cè)人源性Axin2基因的表達(dá)水平，便利了實(shí)驗(yàn)研究中Axin2基因表達(dá)水平的檢測(cè)。本發(fā)明的工作原理是熒光定量PCR相對(duì)定量原理，采用beta-actin基因作為管家基因即參考基因，通過(guò)2-△△Ct法確定基因表達(dá)水平。

根據(jù)NCBI公布的humanAxin2mRNA序列（序列號(hào)：NM_004655.3）設(shè)計(jì)引物探針見(jiàn)表1：

表1.Axin2引物探針設(shè)計(jì)

引物名稱(chēng)序列F-axinGGTTCTGGCTATGTCTTTGCACCR-axinCTGTTTCTTACTGCCCACACGATP-axinFam- ATATCTCACTGTCGTTGGCGCTGG-BHQ1

選擇beta-actin作為內(nèi)參，根據(jù)NCBI公布的betaactin的mRNA序列（序列號(hào)：NM_031144.3）設(shè)計(jì)引物探針序列如下表2：

表2.beta-actin引物探針設(shè)計(jì)