[發明專利]一種雙靶標融合蛋白及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201610248771.1
• 申請日: 2016-04-14
• 公開（公告）號: CN107298714A
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 殷躍云
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/63;C12N1/19;C12N5/10;C12N1/21;A61K39/395;A61P35/00;A61P27/02;A61P9/14
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1.一種雙靶標融合蛋白，所述雙靶標融合蛋白包括三個結構功能區域，所述三個節構功能區域分別是A、B和C。所述A是指血小板生長因子β受體胞外域免疫球蛋白樣區域D1-D3(PDGFRβD1-D3)；所述B是指血管內皮生長因子受體1(VEGFR1)胞外免疫球蛋白樣區域II和血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)胞外免疫球蛋白樣區域III(VEGFR1II-VEGFR2III)；所述C是指人免疫球蛋白恒定區片段(Fc)。

2.如權利要求1所述的雙靶標融合蛋白，其特征在于，所述A、B、C的排列順序是：A-B-C，B-A-C或A-C-B。

3.如權利要求1所述的雙靶標融合蛋白，其特征在于，所述A的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述B的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述C的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.如權利要求2所述的雙靶標融合蛋白，其特征在于，所述雙靶標融合蛋白的結構功能域之間還包括連接肽，所述連接肽的氨基酸序列可以是(GG1G)n或是(GS)n或是(GGGS)n。n＝0，1，2，---，5。

5.一種含有如權利2-4要求所述的表達載體。

6.一種重組的宿主細胞，所述宿主細胞含有如權利要求5所述的表達載體、或者所述宿主細胞染色體中整合有如權利要求2-4要求所述的多核苷酸。

7.如權利要求6所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞選自哺乳動物細胞CHO-S、CHO-K1、HEK-293、COS7、SP20、Sf9、PerC6。

8.如權利要求1-4任一權利要求所述的雙靶標融合蛋白的制備方法，包括：

1)用基因合成法分別得到PDGFRβD1-D3、VEGFR1II-VEGFR2III和Fc的多核苷酸序列；分別將PDGFRβD1-D3、VEGFR1II-VEGFR2III和Fc片段通過搭橋PCR拼接融合，并克隆到質粒中；

2)將所獲得的質粒轉化到宿主細胞中進行表達，得到所需要的雙靶標融合蛋白。

9.一種藥物組合物，含有如權利要求1-4任一權利要求所述的雙靶標融合蛋白及至少一種藥學可接受的載體或賦形劑。

10.如權利要求1-4任一權利要求所述的雙靶標融合蛋白在制備或篩選治療血管增生性腫瘤、濕性老年性視網膜黃斑病變(AMD)的藥物或制劑中的用途。