[發(fā)明專利]多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610246789.8
• 申請日: 2016-04-19
• 公開（公告）號: CN105733884B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛正楷
• 申請（專利權(quán)）人: 瀘州職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/00;C12G3/02
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 謝殿武

1.一種多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：包括以下步驟：

a.將產(chǎn)酸菌細(xì)胞固定于碳纖維載體形成固定化細(xì)胞碳纖維球；

b．將固定化細(xì)胞碳纖維球裝入耐腐蝕的表面均布有通孔的馬氏體不銹鋼空心球中；

c.將裝有固定化細(xì)胞碳纖維球的不銹鋼空心球以8-12個(gè)/m²放入窖池的上層、中層或下層發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后通過電動(dòng)磁力從窖池中吸取出不銹鋼空心球經(jīng)活化處理后進(jìn)行下輪次發(fā)酵；

所述固定化細(xì)胞碳纖維球的裝填量不超過不銹鋼空心球空心體積的90%；所述不銹鋼空心球直徑為10-15cm，所述碳纖維球的直徑為0.6-2cm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟b中，所述不銹鋼空心球?yàn)閮蓚€(gè)大小匹配的兩半球以可拆卸式固定連接構(gòu)成容納固定化細(xì)胞碳纖維球的腔體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟b中，所述不銹鋼空心球的兩半球?yàn)槁菁y連接，所述兩半球中的一個(gè)半球開口外緣部表面設(shè)置有外螺紋，另一半球的開口內(nèi)緣部表面設(shè)置有內(nèi)螺紋。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟a中，所述產(chǎn)酸菌為己酸菌和丁酸菌，所述固定化細(xì)胞碳纖維球的制備方法包括以下步驟：

a1.將碳纖維經(jīng)無菌預(yù)處理；

a2.配置發(fā)酵培養(yǎng)基：所述發(fā)酵培養(yǎng)基的原料包括以下組分：K₂HPO₄ 0.3-0.5g、(NH₄)₂SO₄ 0.4-0.6g、CH₃COONa 5-10g、MgSO₄ 0.2-0.4g、酵母膏1-3g、CaSO₄ 5-10g、蒸餾水800-1200ml；將上述原料混合后在溫度為115-121℃下滅菌15-30分鐘，然后冷卻至70℃以下，最后加入15-20ml的無水乙醇；

a3.將經(jīng)處理的碳纖維以2-15g/L的投入量與發(fā)酵培養(yǎng)基混合后以10-20%的總接種量快速接種己酸菌和丁酸菌，然后放置于搖床中搖動(dòng)2-6小時(shí)，制得大小均勻的固定化細(xì)胞碳纖維球。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟a1中，所述無菌預(yù)處理包括以下步驟：將碳纖維置于丙酮中浸泡3～5h，過濾回收上清液，用相當(dāng)于3～5倍碳纖維體積的水對碳纖維進(jìn)行清洗，然后將清洗后的碳纖維浸泡于體積大于6倍碳纖維體積的沸水浴中處理3～5h后經(jīng)蒸餾水清洗干凈，最后烘干。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟a3中，己酸菌和丁酸菌的接種比例為1:1-2。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟a中，所述碳纖維為長度為0.3-0.8cm的短切碳纖維。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多孔磁性容器包裹固定化細(xì)胞碳纖維球進(jìn)行多輪次發(fā)酵的方法，其特征在于：步驟c中，在溫度為85-95℃下活化處理5-15分鐘后，進(jìn)行下輪次發(fā)酵。