[發明專利]一種胸腺肽α1的融合蛋白

在審

• 申請號: 201610243306.9
• 申請日: 2016-04-19
• 公開（公告）號: CN105669871A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 勞興珍;鄭珩;李晴晴;于婷婷
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/22;A61K47/48;A61P35/00;A61P1/16;A61P31/18
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 張鉑

技術領域

本發明屬于生物工程制藥技術領域,具體涉及一種胸腺肽α1的融合蛋白。

背景技術

胸腺肽α1是一種具有免疫調節作用的小分子活性多肽，Goldstein在20世紀70年代 末期從胸腺生成素第5組分(TF5)中分離純化出一種小分子生物活性多肽，具有胸腺肽類 似的生物活性，命名問胸腺肽α1，它由28個氨基酸組成， Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val -Val-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH。胸腺肽α1現已廣泛應用于臨床，主要用于原發性 和繼發性免疫缺陷癥，如慢性乙型肝炎、重癥乙型肝炎、抗病毒治療AIDS等，并用作各種 惡性腫瘤前期化療、放療的輔助用藥。然而，現有臨床上使用的胸腺肽α1存在半衰期短激 發或引起腫瘤部位的免疫抵抗作用低等缺點。

免疫球蛋白IgG是血液中最豐富的蛋白質之一，其在血液中的半衰期長達21天。免 疫球蛋白一般由四肽鏈組成的，即由二條相同的分子量較小的輕鏈(L鏈，約25kd)和二條 相同的分子量較大的重鏈(H鏈，約50kd)組成的經由二硫鍵連接形成一個四肽鏈分子。IgG 的L鏈具有一個可變區(LH)和恒定區LH。

IgG的H鏈各有一個可變區(VH)和三個恒定區(CH1、CH2和CH3)和位于CH1 和CH2之間的鉸鏈區等功能區構成。VL和VH是與抗原結合的部位，CH2具有補體Clq結 合點，能活化補體的經典活化途徑；CH3具有結合單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、B細胞和 NK細胞Fc受體的功能。

免疫球蛋白恒定區Fc主要是由CH2和CH3組成。當抗原與抗體結合后，Fc可與Fc 受體(FcR)結合，激活補體系統，在抗體依賴性細胞吞噬作用，抗體依賴性細胞介導的細胞 毒性，刺激炎癥反應等方面發揮重要重要作用。有文獻報道將Fc與臨床上一些重要的細胞因 子，如白介素-2，凝血因子VIII，或與可溶性受體，如腫瘤壞死因子受體胞外區結合成融合 蛋白，可以延長原型因子或受體的循環半衰期和或增加原有的生物活性(PeppelK,CrawfordD, BeutlerB.Atumornecrosisfactor(TNF)receptor-IgGheavychainchimericproteinasabivalent antagonistofTNFactivity.JExpMed.1991Dec1；174(6):1483-9.)。

發明內容

本發明目的在于提高一種胸腺肽α1的融合蛋白，由胸腺肽α1或其活性片段，通過連 接肽或者直接與免疫球蛋白恒定區連接而成。該融合蛋白既可以在真核細胞也可以在原核細 胞表達。本發明用重組DNA技術制備了含有目的基因的原核載體，并在大腸桿菌中表達和 分離純化，所獲胸腺肽α1的融合蛋白與原型胸腺肽α1相比，具有更長的體內半衰期和更高 效抗腫瘤效果。

本發明具體技術方案如下：

一種胸腺肽α1的融合蛋白，由胸腺肽α1或其活性片段，通過連接肽或者直接與免疫球蛋白 恒定區連接而成。

優選的，所述免疫球蛋白恒定區是免疫球蛋白重鏈的恒定區。

優選的，所述免疫球蛋白是人IgG4，進一步優選包含免疫球蛋白絞鏈區，恒定區CH2 和恒定區CH3。

優選的，所述胸腺肽α1或其活性片段的氨基酸序列如SEQIDNO:1或2所示，或者， 將SEQIDNO:1或2所示氨基酸序列的C端氨基酸殘基替換為原氨基酸殘基之外的十九種天 然氨基酸的任何一種，或者缺失。二十種天然氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、 異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、 谷氨酰胺、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸和組氨酸。

優選的，所述胸腺肽α1或其活性片段的N端是乙酰化的或非乙酰化的。

優選的，所述免疫球蛋白恒定區氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。

本發明所述的胸腺肽α1的融合蛋白，優選氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。

本發明的另一目的在于提供本發明所述的胸腺肽α1在制備治療原發性和繼發性免疫 缺陷癥和抗腫瘤藥物中的應用。