[發明專利]一種肝素鈉的制備方法

在審

• 申請號: 201610242697.2
• 申請日: 2016-04-19
• 公開（公告）號: CN105693886A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 汪巍;宋奇
• 申請（專利權）人: 常州市藍勖化工有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種肝素鈉的制備方法，屬于生物制藥領域。

背景技術

肝素鈉是一種由動物結締組織的肥大細胞產生的酸性粘多糖的硫酸酯類物質，因其具有強抗凝作用，是防治深層靜脈血栓形成等血栓栓塞性疾病的首選藥物，隨著研究的深入，人們發現肝素鈉不僅有抗凝、抗血栓形成和調整血脂的作用，還有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等多種生物學功能。雖肝素鈉用于臨床已有60余年的歷史，但迄今還沒有一種能夠完全代替它的產品，所以它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化藥物，且目前只能從動物的部分組織中提取，不能人工合成。

肝素鈉的制備，對物料及環境溫度控制要求較高，硬件設施投入較大；該法在去蛋白工藝環節采用強酸性條件操作(pH1.5)，對肝素活性損失較大(肝素溶液在低PH值環境下很不穩定，極易降解失活)，影響最終活性收率和效價，可操作性不強；該法采用超濾濃縮分離技術，超濾設備昂貴，硬件投入較大；該法采用的離子平衡交換方式，是以高濃度鈉離子不斷介入的方式來實現肝素鈉向肝素鈉的轉換，無法保證動態離子平衡轉換的充分性和連續穩定性。國外制備肝素鈉均采用離子交換法，該法需要選用精品肝素鈉為原料，原料成本高，而且在離子交換過程中可引起pH急劇下降，嚴重影響產品的收率和效價，并且交換過程需要在低溫提條件下進行，導致肝素鈉生產硬件設施投入較大，生產成本較高。

發明內容

本發明所要解決的技術問題：針對目前在制備肝素鈉生產硬件設施投入較大，生產成本較高，同時在提取過程中肝素鈉損失大的問題，本發明通過以牛肝為原料，通過酶解，超聲輔助提取，再使用白土脫色及硫酸銨除雜，醇析制備粗肝素鈉，然后通過牛血中超氧化物歧化酶等酶對粗肝素鈉進一步處理，進行純化，最后通過樹脂吸附，脫吸附及干燥，制得肝素鈉，本發明制備的肝素鈉成本低，純度高，提取率高。

為解決上述技術問題，本發明采用如下所述的技術方案是：

（1）稱取新鮮牛肝放入攪碎機中將其粉碎成漿狀物，再將漿狀物與復合風味蛋白酶按質量比7:1，混合均勻，放入容器中，向容器中加入質量分數為1.5％的鞣花酸溶液，加入量為混合物質量的70～75％，使用質量分數為10％的鹽酸調節pH至6.0～6.5，將容器移至超聲振蕩器中，在23～25KHz下振蕩2～3h；

（2）在上述振蕩結束后，將容器內的混合物放入攪拌器中，在6000r/min攪拌30～40min后過濾，收集過濾液，再按固液比1:9，將100目白土和過濾液攪拌均勻，隨后向其中加入硫酸銨攪拌直至無沉淀產生后過濾，收集過濾液，再向過濾液中加入無水乙醇直至無沉淀產生，過濾收集沉淀物，得粗肝素鈉，備用；

（3）收集牛血，將其與質量分數為20％的雙氧水按體積比4:1，混合均勻，再向混合物中加入牛血質量5～7％的蛋白酶及牛血質量8～9％的磷脂酶，在35℃下以150r/min攪拌酶解3～5h，隨后將酶解混合物放入離心機中，以9000～12000r/min離心分離5～10min，收集上清液，得處理液；

（4）按固液比1:3，將備用的粗肝素鈉與上述所得的處理液混合均勻，以120r/min攪拌5～8h，隨后再向其中加入粗肝素鈉等質量的D208樹脂，攪拌30min后過濾收集過濾物，隨后將其按固液比1:2與質量分數為8％的氯化鈉溶液攪拌脫吸附1～2h后過濾，收集過濾液放置于4℃下靜置30min，再過濾，將過濾液進行噴霧干燥，收集干燥物，即可得到肝素鈉。

經檢測本發明所得的肝素鈉得：肝素鈉效價為138～148IU/mg，效價回收率為96～99.2％，肝素鈉為白色。

本發明與其他方法相比，有益技術效果：

（1）本發明制備的肝素鈉成本低，純度高，提取率高；

（2）本發明工藝簡單，廢液排放量少，工藝條件環保，且質量穩定。

具體實施方式