[發(fā)明專利]利用微衛(wèi)星標(biāo)記Thymall-02對(duì)新疆北極茴魚(yú)檢測(cè)的引物和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610241796.9
• 申請(qǐng)日: 2016-04-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105779617B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉云國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一組利用微衛(wèi)星標(biāo)記Thymall-02對(duì)新疆北極茴魚(yú)基因型進(jìn)行檢測(cè)的引物，其特征在于，

其中所述的引物為序列：

正鏈5’- TACCACTGAACCACCAATGC-3’，

負(fù)鏈5’-TTTTAGTGGTGGAATTGTCGC-3’，使用該引物時(shí)的退火溫度為58℃。

2.利用微衛(wèi)星標(biāo)記Thymall-02對(duì)新疆北極茴魚(yú)基因型進(jìn)行檢測(cè)的方法，其特征在于，首先提取新疆北極茴魚(yú)肌肉中的基因組DNA并稀釋備用；再利用新疆北極茴魚(yú)DNA序列中含有的微衛(wèi)星核心序列，使用特異性引物對(duì)新疆北極茴魚(yú)不同個(gè)體的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，從而確定新疆北極茴魚(yú)不同個(gè)體在Thymall-02核心序列區(qū)的基因型，其中所述的新疆北極茴魚(yú)微衛(wèi)星標(biāo)記Thymall-02的特異性引物為：

正鏈5’- TACCACTGAACCACCAATGC-3’，

負(fù)鏈5’-TTTTAGTGGTGGAATTGTCGC-3’，使用該引物時(shí)的退火溫度為58℃。

3.如權(quán)利要求2所述的利用微衛(wèi)星標(biāo)記Thymall-02對(duì)新疆北極茴魚(yú)基因型進(jìn)行檢測(cè)的方法，其特征在于，對(duì)不同新疆北極茴魚(yú)個(gè)體的基因組DNA進(jìn)行的PCR擴(kuò)增，其加樣參數(shù)為：每個(gè)PCR反應(yīng)總體積為25μL，包括100ng新疆北極茴魚(yú)基因組DNA；10×PCR Buffer，2.5μL；Mg²⁺ 1.5 mmol/L；Taq酶1u；dNTP 0.1mmol/L；權(quán)利要求2中的特異性引物各10 pmol；最后加ddH₂O至25μL；設(shè)置PCR儀的程序參數(shù)為：94℃變性5min；94℃ 45sec，58℃ 1min，72℃40sec，該反應(yīng)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min，4℃保存。

4.如權(quán)利要求2所述的利用微衛(wèi)星標(biāo)記Thymall-02對(duì)新疆北極茴魚(yú)基因型進(jìn)行檢測(cè)的方法，其特征在于，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)的步驟：將PCR產(chǎn)物在8％的變性聚丙烯酰胺凝膠中以15W恒功率電泳1.5小時(shí)進(jìn)行分離, 以10％的冰醋酸溶液浸泡30min，然后蒸餾水沖洗5min，再以0.1％的硝酸銀溶液浸泡30min，用3％的碳酸鈉溶液顯色5min，最后用10％的冰醋酸溶液浸泡5min。

5.權(quán)利要求2-4中任意一項(xiàng)所述的方法在新疆北極茴魚(yú)群體間遺傳多態(tài)性圖譜構(gòu)建上的應(yīng)用。