[發明專利]一種利用膠體免疫金免疫滲濾法檢測布魯氏菌病的綜合緩沖液

在審

• 申請號: 201610240023.9
• 申請日: 2016-04-18
• 公開（公告）號: CN105785050A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 石峰;陳創夫;王遠志;盛金良;張虹;杜鮮
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 石河子恒智專利商標代理事務所(普通合伙) 65102
• 代理人: 李靖

技術領域

本發明設計一種利用膠體免疫金免疫滲濾法檢測布魯氏菌病的綜合緩沖液。

背景技術

布魯氏菌病(Brucellosis，簡稱布病)是一種嚴重危害人和家畜健康的“再現性”(reemerging)人畜共患傳染病，是《中華人民共和國傳染病防治法》中規定管理的乙類傳染病。全球約有170個國家和地區流行此病。近年來，布魯氏菌病的人畜疫情在世界范圍內均出現了回升勢頭，并呈持續增長態勢，愈演愈烈。我國除澳門和臺灣疫情未知外，所有的省級單位均已報告或發現布病病例，并且一經發現，病例就會很快增加。近20年來，我國的布病病例持續增加，1998年以后，人布魯氏菌病疫情強勢升高，發病人數逐年上升，2014年報告新發病例，發病率3.14/10萬，較上一年同期上升18.91％。布病的主要流行區集中于我國的“三北”地區，即東北、華北和西北，以內蒙古、新疆、黑龍江、吉林等地疫情尤為嚴重。根據布魯氏菌的細菌學特征和感染宿主的親嗜性，傳統上將布魯氏菌屬分為6個種，即牛種布魯氏菌、羊種布魯氏菌、豬種布魯氏菌、犬種布魯氏菌、綿羊附睪種布魯氏菌和沙林鼠種布魯氏菌。

布魯氏菌病是一種全身性的疾病，感染后不及時的診斷和治療多呈現療程長，預后差、勞動力損失大，衛生消費需求高等特點，給個人、家庭和社會造成極大的經濟損失，甚至由此造成的因病致貧，因病返貧現象非常突出，已成為威脅經濟發展和社會穩定的重要因素之一。由于布病患者臨床表現無特異性，臨床誤診很容易錯過布病患者急性期最佳治療期，從而轉變為很難治愈的慢性期，造成布病患者生活質量嚴重下降。目前，布病的診斷主要依賴于實驗室診斷，主要包括以下幾種方法：①細菌培養法；②血清學診斷方法：虎紅平板凝集實驗，緩沖平板凝集實驗，補體結合實驗，酶聯免疫吸附實驗，熒光偏振實驗，乳汁環狀實驗，布魯氏菌素皮膚實驗等。病原分離法雖精確，但耗時長，陽性檢出率低，對分離環境要求高。虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗因操作簡便、無需特殊設備，成為我國目前檢測人布病和家畜布病常用的方法，但是存在判定結果主觀性強、易出現假陽性或漏檢的等不足。

膠體金免疫滲濾法因其檢測步驟簡單，且結果準確，已被廣泛運用。但是目前的膠體金免疫滲濾卡，只能對離心分離得到的血清進行檢測，無法對全血樣品進行檢測，其主要原因是沒有合適的綜合緩沖液。因此，一種可以對全血樣進行檢測，操作方便，結果準確的綜合緩沖液被提出。

發明內容

本發明公開了一種使用方便，靈敏度高，特異性好，穩定性高的綜合緩沖液，其特征在于包含：低滲緩沖液、非離子型表面活性劑、兩性表面活性劑、一價鹽離子、金屬離子螯合劑和在低滲緩沖液中呈現負電的惰性封閉蛋白，

低滲緩沖液為：巴比妥-鹽酸緩沖液、HEPES緩沖液或Tris-HCl緩沖液中的至少一種，低滲緩沖液的緩沖范圍PH為：7～9，有效濃度為20～200mmol；

非離子表面活性劑為：聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯(TWEEN-80)、聚氧乙烯失水山梨醇月桂酸單酯(TWEEN-20)或十二烷基聚乙二醇醚(brij-35)中的至少兩種，所選的兩種非離子型表面活性劑的有效濃度分別為：0.05％～2％(w/v)；

兩性表面活性劑為：聚乙二醇辛基苯基醚(Tetronic1307)，有效濃度為：0.05％～2％(w/v)；

一價鹽離子為：NaCl或KCl中的至少一種，有效濃度為50mmol～200mmol；

金屬離子螯合劑為：乙二胺四乙酸(EDTA)，有效濃度：10mmol～50mmol；

在低滲緩沖液中呈現負電的惰性封閉蛋白：酪蛋白、不含蛋白酶的牛血清白蛋白組分V的至少一種，有效濃度為：0.1～2％(w/v)。

作為改進，還設有糖成分，糖成分為蔗糖、海藻糖、麥芽糖、乳糖中的至少一種，有效濃度為5％～30％(w/v)。

作為改進，還設有防腐劑，所述防腐劑為NaN₃、Proclin300或硫柳汞中的至少一種，有效濃度為：0.1％～0.5％(w/v)。

綜合緩沖液是通過以下方法制備：在10ml，濃度為0.2M～2M，PH7～9的低滲緩沖液中加入0.5g-2g的惰性封閉蛋白，0.5-1g的一價鹽離子，0.05g-1.5g的非離子表面活性劑，0.05g-1.5g的兩性表面活性劑，0.5-2g的金屬離子螯合劑，5g-30g的糖成分，0.05-0.1g的防腐劑然后用超純水定溶至100ml，分裝在10ml的樣品瓶中。