[發(fā)明專(zhuān)利]一種黃綠木霉菌株及用其制備鐵皮石斛煙用香料的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610239940.5 | 申請(qǐng)日： | 2016-04-18 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN105733994B | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-01-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 黨立志;汪顯國(guó);王明鋒;冒德壽;何靚;者為;趙升奎 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20;C12P1/02;A24B3/12;C12R1/885 |
| 代理公司： | 昆明協(xié)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108 | 代理人： | 謝嘉 |
| 地址： | 650231 云南省昆明*** | 國(guó)省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 黃綠 霉菌 制備 鐵皮 石斛 香料 方法 | ||
1.一種制備鐵皮石斛煙用香料的方法，包括以下步驟：
(1)將保藏編號(hào)為CGMCC No.10839的黃綠木霉HLMM-04(Trichoderma aureoviride)菌株活化兩次后，接種于裝有200mL PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在20～35℃，180rpm下發(fā)酵培養(yǎng)1～7d；所述的PDA液體培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，補(bǔ)蒸餾水至1L，pH5.5～8.5，115℃高壓滅菌15min；所述的黃綠木霉HLMM-04 CGMCC No.10839菌株，具有產(chǎn)纖維素酶，進(jìn)而促進(jìn)纖維素分解成寡糖或單糖的能力；
(2)發(fā)酵液過(guò)濾去除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80％飽和度，4℃下靜置過(guò)夜，離心收集沉淀物并溶于2mL緩沖液中，再用緩沖液進(jìn)行透析，得到粗酶液；所述的緩沖液為：0.02mol/L Na2HPO4-NaH2PO4，pH 7.3；
(3)將鐵皮石斛去污洗凈，破碎后加入兩倍重量的水，混合均勻，調(diào)pH至6.0；加入黃綠木霉HLMM-04粗酶液，發(fā)酵，粗酶液添加量為鐵皮石斛質(zhì)量的5％～20％，發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵時(shí)間2～5h；回流提取3h，過(guò)濾除渣，將上清液減壓濃縮，即得所需煙用香料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備鐵皮石斛煙用香料的方法，其特征在于：按煙用香料重量的5％添加丙二醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備鐵皮石斛煙用香料的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)條件為初始pH 6.5，培養(yǎng)溫度28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d。
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