[發(fā)明專(zhuān)利]一種有機(jī)整體小柱的制備及有機(jī)整體小柱和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610239820.5
• 申請(qǐng)日: 2016-04-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107297086B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒漢法;劉芳潔;姚亞婷;葉明亮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類(lèi)號(hào): B01D15/10
• 分類(lèi)號(hào): B01D15/10;B01D15/16;B01D15/26;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/60
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種有機(jī)整體小柱的制備方法，其特征在于：

具體步驟如下：

（1）配置甲醇與1, 4-丁二醇的混合溶液，其體積比為1:2-2:1；

（2）使用上述步驟（1）得到的甲醇/1, 4-丁二醇混合溶液配置二苯甲酮溶液，其質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.05 -0.20 g/mL；

（3）取上述步驟（2）中得到的二苯甲酮溶液5 μL-20 μL，加入到20 μL GE Loader Tip槍頭內(nèi)，置于紫外發(fā)生器中，于365 nm波長(zhǎng)紫外光下照射反應(yīng)5-20分鐘；離心去除GELoader tip槍頭內(nèi)的二苯甲酮溶液；

（4）重復(fù)上述步驟（3）的過(guò)程1-4次；

（5）取2 μL-4 μL聚合液，加入到步驟（4）中準(zhǔn)備好的GE Loader tip槍頭內(nèi)，置于紫外發(fā)生器（XL-1500 A, Spectronics公司, New York, USA）中，于365 nm波長(zhǎng)下照射反應(yīng)5-20分鐘，得到磷酸基離心小柱；

聚合液溶劑的體積組成為：12%-15% EGMP（乙烯基乙二醇甲基丙烯磷酸酯）、40.0-49.0% DMSO（二甲基亞砜）、7.0-10.0% DMF（二甲基甲酰胺）、32.0-35.0%十二烷醇；溶質(zhì)為0.05-0.20 g/mL Bis（亞甲基雙丙烯酰胺）；

（6）配置40-60 mg/mL硫酸鈦水溶液，加入到上述步驟（5）中制備好的磷酸基離心小柱內(nèi)，4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心反應(yīng)10-20分鐘，棄掉離心分離出的液體；重復(fù)上述操作過(guò)程2-4次；

（7）配置洗滌水溶液1，其中，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20-40%、三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為0.1-0.3%、余量為水，在4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心洗滌步驟（6）得到的小柱，棄掉離心分離出的液體；重復(fù)上述操作過(guò)程4-6次；

（8）配置洗滌水溶液2，其中，氯化鈉的摩爾濃度為150-300 mM、余量為水，在4000-8000g轉(zhuǎn)速下離心洗滌步驟（7）得到的小柱，棄掉離心分離出的液體；重復(fù)上述操作過(guò)程4-6次；

（9）用去離子水洗滌上述步驟（8）中的離心小柱，在4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心洗滌，棄掉離心分離出的液體；重復(fù)上述操作過(guò)程4-6次，獲得所需產(chǎn)物Ti (IV)-IMAC有機(jī)整體小柱。

2.一種權(quán)利要求1所制備的有機(jī)整體小柱。

3.一種權(quán)利要求2所述的有機(jī)整體小柱的應(yīng)用，其特征在于：將有機(jī)整體小柱用于復(fù)雜肽段樣品富集分析，具體步驟如下：

（1）配置上樣緩沖水溶液，其中乙腈的體積分?jǐn)?shù)為70-90%、三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為5-7%、余量為水；

（2）使用上述步驟（1）中的上樣緩沖水溶液，酸化平衡Ti (IV)-IMAC有機(jī)整體小柱，離心棄掉其中的液體；重復(fù)上述操作過(guò)程2-4次；

（3）使用上述步驟（1）中的上樣緩沖水溶液與復(fù)雜肽段樣品混合，其體積比為1:2-2:1，并轉(zhuǎn)移至Ti (IV)-IMAC有機(jī)整體小柱內(nèi)，在4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心富集，離心分離出的液體再次轉(zhuǎn)移至Ti (IV)-IMAC有機(jī)整體小柱內(nèi)；重復(fù)上述操作過(guò)程1-3次；

（4）配置洗滌水溶液1，其中，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為40-60%、三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為5-7%、氯化鈉的摩爾濃度為150-300 mM、余量為水；在4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心洗滌步驟（3）得到的小柱，棄掉洗滌液；重復(fù)上述離心洗滌操作過(guò)程1-3次；

（5）配置洗滌水溶液2，其中，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20-40%、三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為0.1-0.3%、余量為水；在4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心洗滌步驟（4）得到的小柱，棄掉洗滌液；重復(fù)上述離心洗滌操作過(guò)程1-3次；

（6）配置洗脫水溶液，其中氨水的體積分?jǐn)?shù)為5-20%、余量為水；在4000-8000 g轉(zhuǎn)速下離心洗滌步驟（5）得到的小柱，收集洗脫液；重復(fù)上述離心洗脫操作過(guò)程1-3次，合并洗脫液得產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述有機(jī)整體小柱的應(yīng)用，其特征在于：

所述復(fù)雜肽段樣品為細(xì)胞樣品、血液樣品或者組織樣品中的一種或二種以上的蛋白質(zhì)混合物的胰蛋白酶酶解液中的一種或二種以上。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述有機(jī)整體小柱的應(yīng)用，其特征在于：應(yīng)用于所述有機(jī)整體小柱可實(shí)現(xiàn)磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的分析，可獲取相應(yīng)的磷酸肽和磷酸化位點(diǎn)的鑒定結(jié)果，該結(jié)果可以用于翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析。