[發明專利]一種近交系小鼠胚胎腭突體外旋轉培養儀及其培養方法

在審

• 申請號: 201610239707.7
• 申請日: 2016-04-18
• 公開（公告）號: CN105670931A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 肖文林;張岱尊
• 申請（專利權）人: 肖文林
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N5/073
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 陸薇薇

1.一種近交系小鼠胚胎腭突體外旋轉培養儀，其特征在于，包括載物旋轉盤和箱體，載物旋轉盤位于箱體的上方；

箱體內設置鋰電池、和控制電路，鋰電池、直流電機和控制電路互相連接，減速機與直流電機相連，載物旋轉盤通過傳動軸與減速機相連；

轉速調節閥與直流電機相連；箱體的外壁設有顯示屏。

2.根據權利要求1所述的旋轉培養儀，其特征在于，所述的鋰電池是可充電式鋰電池。

3.根據權利要求2所述的旋轉培養儀，其特征在于，箱體的外壁設有充電口，鋰電池與充電口相連。

4.利用權利要求1或2所述的旋轉培養儀培養近交系小鼠胚胎腭突的方法，其特征在于，包括下列步驟：

（1）將孕13.5天的近交系小鼠脫頸處死,在75%的酒精中浸泡消毒，無菌環境下，取出胚胎，在解剖顯微鏡下解剖取材，將胚胎上的融合前的腭突組織取出；

（2）將腭突組織放置于直徑為3cm的培養皿內的微孔濾膜上并加入培養液，并保證濾膜漂浮在培養液表面；將置有腭突組織的培養皿放入載物旋轉盤，設定旋轉培養儀的轉速為20-25轉/分鐘；將旋轉培養儀放到含有5%的二氧化碳、37℃的培養箱中培養；

（3）第一次換液：步驟（2）培養24h后，無菌條件下取出旋轉培養儀并更換培養皿中的培養液，加入相同體積和成分的培養液，然后在培養液中額外加入殼聚糖，殼聚糖與培養液的重量比是1-2:10；同時將旋轉培養儀的轉速勻速升高到35-40轉/分鐘；

（4）第二次換液：步驟（3）培養12h后，無菌條件下取出旋轉培養儀并更換培養皿中的培養液，加入相同的培養液，然后在培養液中額外加入胎牛血清FBS，胎牛血清FBS與培養液的重量比是2-3:10；同時將旋轉培養儀的轉速調整為30-35轉/分鐘；

（5）步驟（3）培養6h后，將旋轉培養儀的轉速勻速降低到零，每分鐘降低0.5-1轉；旋轉培養儀靜止后，繼續培養6h，直到腭突組織的雙側腭突完全融合，培養結束。

5.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，升高轉速時每分鐘升高0.5-1轉。