[發明專利]棉花細胞質雄性不育恢復系InDel標記及其進行鑒定的方法

有效

• 申請號: 201610238859.5
• 申請日: 2016-04-15
• 公開（公告）號: CN105755140B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 吳建勇;邢朝柱;張夢;郭立平;戚廷香
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種棉花細胞質雄性不育恢復系InDel標記，其特征在于，其為長度102bp的特異插入片段，插入位點在ChrD05：54091891，核苷酸序列為：

AACTTGTGCCTCTGACAGTAAAAAAAGGCATCTTCAATAGTGCTTTCGAATGCACTCTTGAATGTCTGTTCAAACTTGTGCCTTTCACAGTAAAAAAAGGCT，如SEQ ID No.1所示。

2.利用權利要求1所述棉花細胞質雄性不育恢復系InDel標記的分子鑒定方法，其特征在于，具體步驟如下：

利用特異性引物對進行PCR反應，擴增待測棉花材料的DNA，根據擴增結果進行判斷，標準如下：

擴增出267bp單一條帶的棉花材料不含恢復基因位點；

擴增出369bp單一條帶的棉花材料的恢復基因位點純合；

同時擴增出267bp和369bp兩個條帶的棉花材料的恢復基因位點雜合；

所述特異性引物對的核苷酸序列為：

正向引物5'-AAAATGTCATCTTCAATAGTGCTT-3'，如SEQ ID No.2所示；

反向引物5'-ATTTTACGGTATCTTTTGAAACCA-3'，如SEQ ID No.3所示。

3.如權利要求2所述的分子鑒定方法，其特征在于，其PCR反應體系如下：

反應體系總體積20μl。

4.如權利要求3所述的分子鑒定方法，其特征在于，PCR反應條件為：94℃預變性3min；94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸60sec，30個循環；4℃保存。

5.用于權利要求2-4任一項所述分子鑒定方法的特異性引物對，其特征在于，其為：

正向引物5'-AAAATGTCATCTTCAATAGTGCTT-3'，如SEQ ID No.2所示；

反向引物5'-ATTTTACGGTATCTTTTGAAACCA-3'，如SEQ ID No.3所示。

6.如權利要求1所述的棉花細胞質雄性不育恢復系InDel標記在棉花細胞質雄性不育恢復系選育中的應用。

7.如權利要求1所述的棉花細胞質雄性不育恢復系InDel標記在棉花細胞質雄性不育恢復系純度鑒定中的應用。

8.如權利要求2-4任一項所述的分子鑒定方法在棉花細胞質雄性不育恢復系選育中的應用。

9.如權利要求2-4任一項所述的分子鑒定方法在棉花細胞質雄性不育恢復系純度鑒定中的應用。

10.如權利要求5所述的特異性引物對在棉花細胞質雄性不育恢復系選育及棉花細胞質雄性不育恢復系純度鑒定中的應用。