[發明專利]一種木聚糖酶的生產方法

有效

• 申請號: 201610233030.6
• 申請日: 2016-04-15
• 公開（公告）號: CN107299093B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 宋宵因;吳鵬;趙路;劉寶龍
• 申請（專利權）人: 蘇州昆藍生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/84
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種木聚糖酶的生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將畢赤酵母菌種按照質量百分比6%～12%的接種量接種到畢赤酵母一級種子培養基中，保持溶氧25%～55%，28℃～30℃培養8h～12h，得到畢赤酵母一級種子液，將里氏木霉的菌種按照質量百分比10%～15%的接種量接種到里氏木霉一級培養基中，保持溶氧25%～55%，28℃～32℃培養16h～20h，得到里氏木霉一級種子液；

（2）將步驟（1）中得到的畢赤酵母一級種子液按照質量百分比6%～12%的接種量接種到畢赤酵母二級種子培養基中，保持溶氧25%～55%，28℃～30℃培養8h～12h，得到畢赤酵母二級種子液，將步驟（1）中得到的里氏木霉一級種子液按照質量百分比10%～15%的接種量接種到里氏木霉二級培養基中，保持溶氧25%～55%，28℃～32℃培養16h～20h，得到里氏木霉二級種子液；

（3）將步驟（2）中得到的畢赤酵母二級種子液按照質量百分比6%～12%的接種量接種到發酵培養基中，保持溶氧25%～55%，pH4.2以上，轉速100rpm～120rpm，28℃～32℃培養36h～42h，將步驟（2）中得到里氏木霉二級種子液按照質量百分比10%～15%的接種量接種到上述經畢赤酵母發酵過的發酵培養基中，保持溫度、溶氧、pH條件不變，轉速150rpm～170rpm培養16h～18h，按照質量百分比0.5%～5%的加量加入誘導物，保持溫度、溶氧、pH條件不變，轉速220rpm～240rpm培養72h～78h后得到木聚糖酶發酵液，其中發酵培養基的成分為：120g/L～150g/L原糖蜜，70g/L～90g/L玉米DDGS，0.5g/L～1g/L磷酸二氫銨，0.5g/L～0.75g/L碳酸鈣，0.4g/L～0.75g/L硫酸錳，0.05g/L～0.1g/L蛋白酶，0.5g/L～0.75g/L植酸酶，所述誘導物由以下方法制得：將甘蔗渣粉碎至長度0.5mm～1.5mm，用高能電子輻照加速器能量范圍6MeV～8MeV輻照8min～10min；

（4）將步驟（3）得到的發酵醪液進行板框壓濾，澄清后超濾濃縮到所需要的酶活力；

（5）向步驟（4）得到的濾液中加入質量百分比0.05%～0.5%的防腐劑和質量百分比15%～25%的保護劑，灌裝成為成品木聚糖酶；

其中，步驟（1）和步驟（2）中，畢赤酵母的一級種子培養基和二級種子培養基成分為：15～25g/L葡萄糖,10～20g/L原糖蜜,10～15g/L酵母浸膏,10～15g/L蛋白胨，1～2g/L磷酸二氫銨；步驟(1)和步驟(2)中，里氏木霉的一級種子培養基和二級種子培養基成分為：15～25g/L葡萄糖，8～12g/L原糖蜜，15～25g/L酵母浸膏，0.5～1g/L硫酸銨，0.25～0.5g/L硫酸錳，0.25～0.5g/L硫酸鋅。

2.根據權利要求1所述的木聚糖酶的生產方法，其特征在于，步驟（5）中所述防腐劑由以下質量分數的各組分組成：35%～45%氯化鈉、20%～35%山梨酸鉀、15%～30%丙酸鈉、10%～25%脫氫乙酸鈉。

3.根據權利要求1所述的木聚糖酶的生產方法，其特征在于，步驟（5）中所述保護劑由以下質量分數的各組分組成：40%～50%甘油、35%～45%山梨醇、10%～20%海藻糖。

4.根據權利要求1所述的木聚糖酶的生產方法，其特征在于，步驟（3）為，將步驟（2）中得到的畢赤酵母二級種子液按照質量百分比10%的接種量接種到發酵培養基中，保持溶氧25%～55%，pH4.2以上，轉速115rpm，29℃培養40h，將步驟（2）中得到里氏木霉二級種子液按照質量百分比12%的接種量接種到發酵培養基中，保持溫度、溶氧、pH條件不變，轉速160rpm培養18h，按照質量百分比2%的加量加入誘導物，保持溫度、溶氧、pH條件不變，轉速230rpm培養72h后得到木聚糖酶發酵液。

5.根據權利要求1所述的木聚糖酶的生產方法，其特征在于，步驟（3）中，所述發酵培養基的成分為：125g/L原糖蜜，75g/L玉米DDGS，0.75g/L磷酸二氫銨，0.6g/L碳酸鈣，0.5g/L硫酸錳，0.075g/L蛋白酶，0.6g/L植酸酶。