[發明專利]用于甘藍枯萎病抗性篩選的PCR引物、試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 201610228387.5 | 申請日： | 2016-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN105695609B | 公開（公告）日： | 2019-01-08 |
| 發明（設計）人： | 呂紅豪;劉星;韓風慶;方智遠;楊麗梅;莊木;張揚勇 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129 | 代理人： | 吳泳歷 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 甘藍 枯萎病 抗性 篩選 pcr 引物 試劑盒 及其 應用 | ||
1.用于篩選甘藍(Brassica oleracea L.)枯萎病抗性材料的PCR引物，其核苷酸序列為：
上游引物Frg13-F：5`-ACCAGAGGCAGTTTTGGTTG-3’
下游引物Frg13-R：5`-TCTTGCAACCCATGTCAAAA-3’；
所述PCR引物擴增的甘藍枯萎病抗性材料特征條帶大小為263bp，其核苷酸序列如SeqID No.3所示。
2.用于篩選甘藍枯萎病抗性材料的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的PCR引物。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進行PCR和/或電泳所需的試劑。
4.用于篩選甘藍枯萎病抗性材料的方法，其特征在于，包括采用權利要求1所述的PCR引物和/或權利要求2或3所述的試劑盒進行如下步驟：
(1)采用所述PCR引物對待測甘藍材料的基因組DNA進行PCR；
(2)凝膠電泳檢測所述PCR產物；
(3)從所述電泳檢測結果中篩選出與所述甘藍枯萎病抗性材料特征條帶大小一致的材料；
所述甘藍枯萎病抗性材料特征條帶為263bp，其核苷酸序列如Seq ID No.3所示。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR反應體系為：模板基因組DNA 0.2μL/μL，包含Mg2+的10×PCR buffer緩沖液0.1μL/μL，dNTPs 0.2mM，Taq DNA聚合酶0.5U/μL，正向引物和反向引物0.4μM，其余為雙蒸水。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR的反應條件為：94℃預變性5min；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，35個循環；72℃延伸7min；4℃保存。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述凝膠電泳檢測指采用8％的聚丙烯酰胺凝膠，于160V恒功率電泳分離70分鐘，最后銀染顯色。
8.權利要求2或3所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，在標有甘藍枯萎病抗性篩選用途的包裝盒內裝有權利要求1所述的PCR引物。
9.權利要求8所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述標有甘藍枯萎病抗性篩選用途的包裝盒內還裝有用于進行PCR和/或電泳所需的試劑。
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