[發(fā)明專利]一種茄子自然游離小孢子與花藥共培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610227166.6
• 申請日: 2016-04-13
• 公開（公告）號: CN105850738B
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王利英;喬軍;李素文;劉婧;黃亞杰
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科潤農(nóng)業(yè)科技股份有限公司蔬菜研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種茄子自然游離小孢子與花藥共培養(yǎng)高效誘導(dǎo)單倍體的方法，其特征在于如下的步驟進行：

1）種植環(huán)境：花蕾所在茄子植株為人工氣候箱或是保護地栽培，夜間溫度為15℃，晝夜溫差達到10℃-20℃，植株健壯無病蟲害；

2）花蕾標(biāo)準(zhǔn)：花蕾采集標(biāo)準(zhǔn)為花冠與萼裂處齊平，對茄至八面風(fēng)節(jié)位，內(nèi)部花藥為黃綠色，且花冠包裹緊密；

采集花蕾后用牛皮紙袋包好放置在4℃冰箱24小時后開始進行花藥預(yù)培養(yǎng)；

3）預(yù)培養(yǎng)特點：預(yù)培養(yǎng)基為添加了2mg/LKT的MS培養(yǎng)基，pH 5.8，花藥預(yù)培養(yǎng)后放置于36℃光照培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)6天；

4）自然游離與共培養(yǎng)：機械切割花藥，避免擠壓和離心，使小孢子自然游離于液體培養(yǎng)基中，同時將花藥殘體保留在液體培養(yǎng)基中與游離出的小孢子進行共培養(yǎng)；

培養(yǎng)基為添加了0.2mg/L2,4-D、1mg/LKT、1mg/L6-BA和5%葡萄糖的KM培養(yǎng)基，PH 5.8；

5) 培養(yǎng)條件：小孢子培養(yǎng)條件為25℃暗培養(yǎng)60-90天，當(dāng)花藥中部和尖部有白色愈傷組織長出，達到3毫米以上直徑就轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中25℃弱光培養(yǎng)；所述的分化培養(yǎng)基為添加了0.01mg/LNAA、2mg/L6-BA、2%蔗糖、5g/L瓊脂和0.5g/L活性炭的MS培養(yǎng)基；

6) 當(dāng)分化培養(yǎng)基中愈傷組織轉(zhuǎn)綠就放置在光照強度2000Lx、光照14h/d、溫度25℃的組培架上進行培養(yǎng)，每間隔15天切割繼代一次，一個月后可長出綠色芽苗；

7）提前配制生根培養(yǎng)基，主要成分為1/2MS+0.2mg/LIBA+ 5g/L瓊脂+3%蔗糖+0.5g/L活性炭，pH值5.8，當(dāng)綠色芽苗長至1-3厘米高時即轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基，放置于光照強度2000Lx、光照14h/d、溫度25℃的組培架上培養(yǎng)；

8）8-12天切口處可見不定根生長，20天后長成帶根小苗，之后用流式細(xì)胞儀檢測每株小孢子再生苗，確定再生苗倍性，如為單倍體及時進行加倍處理。

2.采用權(quán)利要求1所述茄子自然游離小孢子與花藥共培養(yǎng)高效誘導(dǎo)單倍體方法在克服基因型影響，提高茄子單倍體誘導(dǎo)率方面的應(yīng)用。