[發(fā)明專利]人C?反應(yīng)蛋白熒光定量檢測試紙卡

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610225639.9
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105842440B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬永;時振華;丁娜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇晶紅生物醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的涉及兩種抗人C-反應(yīng)蛋白(CRP)抗體及其制備方法以及上述抗體在人C-反應(yīng)蛋白檢測中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

C-反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)是蛋白質(zhì)家族中的一員，是一種急性期反應(yīng)蛋白，在組織損傷和細(xì)菌感染時血漿濃度急劇升高，是機體重要的防御分子，主要由肝臟產(chǎn)生并分泌。CRP由五個完全相同的球形單體以非共價鍵結(jié)合組成穩(wěn)定的盤狀結(jié)構(gòu)，屬于正五聚體家族。CRP在結(jié)構(gòu)上為對稱的五面體，其單體由206個氨基酸組成，分子量約為23KDa，CRP的總分子量約為118KDa。CRP參與體內(nèi)的各種炎癥及免疫反應(yīng)，是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)的重要標(biāo)志物。大量研究表明：高水平的CRP是周圍性血管病、心肌梗死、腦血管病及血管性死亡的獨立風(fēng)險預(yù)測因子。

在正常人血清中CRP含量極少，濃度為0.062-8.2mg/L，半衰期約為15小時。當(dāng)發(fā)生細(xì)菌感染2小時后即開始升高，平均8小時增加1倍，48小時達(dá)高峰，其在病毒感染時則不會升高。CRP持續(xù)升高則提示機體存在慢性炎癥或自身免疫性疾病。CRP變化不受病人的個體差異、機體狀態(tài)及治療藥物的影響。另外，CRP在其他領(lǐng)域亦發(fā)揮著重要的作用：①在由慢性炎癥引發(fā)心血管疾病的獨立危險因素中CRP的作用已被證實，及時監(jiān)測CRP的水平變化對心血管疾病的干預(yù)及預(yù)后起重要作用。有些學(xué)者甚至認(rèn)為CRP可作為心血管危險評估的金標(biāo)準(zhǔn)，且CRP水平越高，發(fā)生心腦血管的危險性就越大；②CRP可用來評價急性胰腺炎的嚴(yán)重程度，當(dāng)發(fā)生廣泛壞死性胰腺炎時血清中CRP的水平可高達(dá)250mg/L；③如將CRP與甲胎蛋白聯(lián)合應(yīng)用，可用來鑒別肝臟惡性腫瘤與良性疾病，為臨床治療方案制定提供指導(dǎo)；另外，CRP測定對腫瘤的治療和預(yù)后亦有積極的意義，惡性腫瘤患者CRP水平大都升高，手術(shù)切除腫瘤后CRP水平則會下降，且進(jìn)行放療、化療和皮質(zhì)激素治療對血清CRP的影響非常小，所以測定血清CRP的水平變化有助于臨床估測各個器官系統(tǒng)中惡性腫瘤的進(jìn)展過程。④評估患者預(yù)后：CRP水平越高，提示疾病控制不佳，預(yù)后不良。

鑒于CRP在眾多領(lǐng)域中的重要作用，制備CRP抗體并用于制備CRP定量檢測試劑盒具有重要的臨床應(yīng)用價值。CRP通常是通過抗體濁度法或免疫比濁法測定的，而他們的檢測能力在3-5mg/L以上，這個水平僅僅適用于對感染的預(yù)測，而對于冠脈及腦血管的危險預(yù)測是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。除上述技術(shù)以外，使用膠體金和熒光定量檢測技術(shù)的CRP試紙卡，可滿足快速檢測及床旁檢測的需求。其中熒光定量檢測具備較高的檢測性能，因此適用于檢測精密度要求較高的檢驗中心或大型醫(yī)院臨床科室的應(yīng)用需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供能有效的、特異性結(jié)合人C-反應(yīng)蛋白的抗體。更具體地說：

本發(fā)明的第一目的在于提供兩種抗人C-反應(yīng)蛋白抗體。

第一種抗人C-反應(yīng)蛋白抗體(記為P24)，

其重鏈可變區(qū)含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其輕鏈可變區(qū)序列含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

優(yōu)選的是本發(fā)明中的抗體P24的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

第二種抗人C-反應(yīng)蛋白抗體(記為P03)，

其重鏈可變區(qū)含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：9所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：10所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：11所示的HCDR3；

以及其輕鏈可變區(qū)序列含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：12所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：13所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：14所示的LCDR3。

優(yōu)選的是本發(fā)明中的抗體重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。

本發(fā)明第二個目的是提供兩種單鏈抗體，所述單鏈抗體P24的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述單鏈抗體P03的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示。