[發明專利]一種利用種間雜交和分子標記輔助選擇引入L3基因選育甜椒自交系的方法

在審

• 申請號: 201610225162.4
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105724243A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 王立浩;張寶璽;張正海;毛勝利;曹亞從
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;C12Q1/68
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

技術領域

本發明涉及育種領域，具體涉及一種利用種間雜交和分子標記輔助選擇引入L3基因選育甜椒自交系的方法。

背景技術

我國是世界上甜、辣椒(CapsicumannuumL)種植和消費量最多的國家。自上世紀80年代，市場需求和種植面積不斷擴大，播種面積由80年代末400萬畝增加到如今3000萬畝(王立浩等，2016)。

病毒病是甜、辣椒生產中最主要的病害，可造成減產30-70％或絕收，同時嚴重降低產品品質。

煙草花葉病毒TMV在露地和保護地(特別是保護地)均有發生，原來的抗病品種(含L1、L2基因)表現為不抗，被病害所克服。L3報道抗TMVP(0,1,2),L4基因抗TMVP(0,1,2,3)，能夠對抗TMV、ToMV、PMMoV。目前保護地辣椒生產中煙草花葉病毒屬的TMV、ToMV、PMMoV對于生產造成了很大威脅。保護地長季節生產面積增加較快，但我國傳統的辣椒資源的抗病性不強，限制了保護地品種的選育；因此一度長季節保護地所用品種幾乎全部為國外品種，培育具有國內品種成為我國蔬菜育種工作者的迫切任務。

發明內容

本發明的目的建立一種高效的辣椒育種方法，將L3基因的抗煙草花葉病毒病性導入到配合力高，大果，優良自交系0516中。

本發明利用200374:PI152225是屬于中國辣椒(C.Chinense)，2003年法國農業科學院AlainPalloix博士提供，群體整齊，分枝性強，果實小(1.6cm×4.0cm)。在我國北方結果性差，同一年生辣椒雜交親和性低，含有L3基因，高抗TMV，作為抗TMV抗原材料。200316:SOLARIO，2003年從法國引進的甜椒F1品種。果實大，燈籠形，中抗CMV和疫病。

根據本發明的育種方法，PI152225與200316進行邊分離、邊回交轉育，并采用分子標記輔助選擇L3基因的方法。材料經過了5代回交和3代的自交，獲得純和自交系0516。經過鑒定0516抗TMV。自交系0516，生長勢中，葉大、葉量大，葉色深綠。莖有細絨毛，中晚熟，始花節位9.7，平均單果重200克，果實縱徑11.1厘米，橫徑9.9厘米，3-4心室，果實綠略淺，果面光滑、有光澤。2005年經人工接種鑒定，抗病性：TMV抗性8.9；CMV抗性29.5，疫病43.9。6個組合產量情況，其中折合畝產產量最高的組合是0516、KLS。6份材料的產量一般配合最高的是0516，分別是222.4。

根據本發明的利用種間雜交和分子標記輔助選擇引入L3基因選育甜椒自交系的方法包括以下步驟：

(1)種間雜交：以PI152225為母本，Solanrio為父本進行雜交，經過浸種、發芽，獲得了F1代植株；

(2)分子標記輔助選擇，提取回交1代之后的分離群體單株的DNA，利用CAP分子標記進行選擇，其中所用引物為：F:5’-GTGCCAGAGGAGGATTTAT；R:5’-GCGAGGTGGACACTGATACT；

(3)結合生長性狀選擇篩選材料，根據抗病性篩選材料，抗病性篩選標準為：TMV抗性8.9；CMV抗性29.5，疫病43.9；

(4)回交：利用步驟篩選的材料為回交親本進行回交，回交后代中利用CAPS分子標記進行選擇，園藝性狀的選擇，經過5代回交，和3代自交獲得材料

選擇系譜見圖3。圖1顯示了BC1代不同單株的L3分子標記的多態情況。材料經過了5代回交和3代的自交，獲得純和自交系0516。

根據本發明的具體實施方式，所述利用種間雜交和分子標記輔助選擇引入L3基因選育甜椒自交系的方法包括步驟：

(1)種間雜交：自2003年開始，利用兩份材料進行了種間雜交，以PI152225(美國農業部種子資源庫編號)為母本，Solanrio(商業品種)為父本進行雜交。雜交親和力低，產籽率低，僅獲得少數幾粒飽滿種子。經過正常的浸種、發芽，獲得了F1代植株。

(2)基因組DNA的提取與檢測

提取回交1代之后的分離群體單株的DNA，用于檢測供篩選分子標記的多態性。