[發明專利]一種多重PCR檢測六類大腸桿菌的試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201610222017.0
• 申請日: 2016-04-11
• 公開（公告）號: CN105779605A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 胡彬;熊衍文;畢振旺;房明;劉宗東
• 申請（專利權）人: 山東省疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

1.一種多重PCR檢測六類大腸桿菌的引物組，其特征在于，包括10對檢測引物，分別為： Rrs基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；ipaH基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，下游引物核苷 酸序列如SEQIDNO.4所示；stx1基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.5所示， 下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；stx2基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；eae基因檢測引物，上游引物核苷 酸序列如SEQIDNO.9所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；aggR基因檢測引 物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.12所示； elt基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.14所示；estIa基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，下游引物 核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；estIb基因檢測引物，上游引物核苷酸序列如SEQID NO.17所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；afaD基因檢測引物，上游引物核苷 酸序列如SEQIDNO.19所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.20所示。

2.一種多重PCR檢測六類大腸桿菌的試劑盒，其特征在于，包括：

權利要求1所述多重PCR檢測六類大腸桿菌的引物組；

TaqDNA聚合酶；

dNTP溶液；

反應緩沖液；

ddH₂O。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述多重PCR檢測六類大腸桿菌的引物組 中，Rrs基因檢測引物：ipaH基因檢測引物：elt基因檢測引物：aggR基因檢測引物：eae基因 檢測引物：stx1基因檢測引物：stx2基因檢測引物：estIa基因檢測引物：estIb基因檢測引 物：afaD基因檢測引物的摩爾比為0.4：0.4：2：0.5：0.4：0.5：0.5：2：2：1，每50μlPCR反應總 體系中加入多重PCR檢測六類大腸桿菌的引物組19.4μl。

4.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述TaqDNA聚合酶濃度為5U/μl，每50μ lPCR反應總體系中加入0.8μlTaqDNA聚合酶。

5.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述dNTP溶液每50μlPCR反應總體系中加 入8μl。

6.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述反應緩沖液為10×PCRbuffer，每50μ lPCR反應總體系中加入10μl。