[發明專利]一種斑點叉尾鮰致病性魯氏耶爾森氏菌的保藏方法有效
| 申請號： | 201610221806.2 | 申請日： | 2016-04-12 |
| 公開（公告）號： | CN105754859B | 公開（公告）日： | 2019-06-21 |
| 發明（設計）人： | 楊移斌;艾曉輝;楊秋紅;劉永濤;董靖;胥寧 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院長江水產研究所 |
| 主分類號： | C12N1/04 | 分類號： | C12N1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州賽科專利代理事務所(普通合伙) 33230 | 代理人： | 馮年群 |
| 地址： | 430223 湖北省武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 斑點 叉尾鮰 致病性 魯氏耶爾森氏菌 保藏 方法 | ||
1.一種斑點叉尾鮰致病性魯氏耶爾森氏菌的保藏方法，其特征在于，所述保藏方法如下：
1）培養基準備：腦心浸出液瓊脂培養基倒平板，將適量無菌磁性有序介孔介質均勻分布于平板上備用；
2）魯氏耶爾森氏菌的誘導培養：將魯氏耶爾森氏菌接種于步驟1）的腦心浸出液瓊脂培養基平板上，于25~28℃恒溫培養12-36h；
3）魯氏耶爾森氏菌的保藏：挑取適量上述培養結束的培養基連同無菌磁性有序介孔介質放入無菌具塞塑料離心管中，加入適量無菌蒸餾水和pH5.5-5.8的葡萄糖瓊脂培養基于無菌具塞塑料離心管中，置于0-4℃恒溫冰箱保藏；
所述磁性有序介孔介質為磁性有序介孔鐵酸鎳，其制備方法如下：
1）將Ni(NO3)2·6H2O和Fe(NO3)3·9H2O溶解于甲醇中，將適量多孔硅KIT-6放入盛有正己烷的聚四氟乙烯容器中，充分攪拌；
2） 將步驟1）中Ni(NO3)2·6H2O和Fe(NO3)3·9H2O的甲醇溶液逐滴加入步驟1）中盛有正己烷和適量多孔硅KIT-6的聚四氟乙烯容器中，所形成的混合溶液充分攪拌，于50-60℃加熱8-12h；
3）步驟2）所得固體于250-280℃下灼燒4-5h；
4） 將步驟3）所得固體冷卻至室溫，經研磨后轉移至盛有NaOH溶液的圓底燒瓶內，于40-50℃水浴條件下回流攪拌24-36h后離心回收；
5）將步驟4）所得固體分別用乙醇和去離子水反復清洗至中性后，經真空干燥即可。
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