[發(fā)明專利]Corin基因變異體及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610221280.8
• 申請(qǐng)日: 2016-04-11
• 公開（公告）號(hào): CN105734070A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳慶宇;董寧征;張玥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/57
• 分類號(hào): C12N15/57;C12N9/64;C12Q1/68;G01N33/573
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒;張淏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及Corin基因變異體及其在制備高血壓診斷試劑和妊娠高血壓疾病診斷試劑中的用途。

背景技術(shù)

高血壓（Hypertension）是一種常見(jiàn)的心血管疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）估計(jì)，世界范圍內(nèi)約1/3的成年人患有高血壓。高血壓同時(shí)增加了血栓形成、急性心肌梗死、中風(fēng)、腎功能衰竭和心力衰竭等高死亡率疾病的發(fā)生率，這些疾病所帶來(lái)的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)是巨大的。隨著我國(guó)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，高脂血癥和肥胖等高血壓和心血管疾病的危險(xiǎn)因素也在日益增加，高血壓和心血管疾病已成為我國(guó)現(xiàn)代社會(huì)主要的健康問(wèn)題。

眾所周知，遺傳因素和環(huán)境因素共同參與了高血壓的發(fā)病機(jī)制。目前已知的與高血壓相關(guān)的基因包括上皮細(xì)胞鈉通道、鈉/鉀轉(zhuǎn)運(yùn)酶、腎素-血管緊張素-醛固酮、鉀通道以及心鈉肽（又稱心鈉素）基因等。然而，高血壓患者中僅有5%能夠明確診斷為由特定基因缺陷而致病，大部分患者的致病機(jī)制尚不明確。妊娠期高血壓疾病（又稱妊娠高血壓綜合征，Pregnancy-inducedhypertensionsyndrome）發(fā)生的相關(guān)因素包括血管生長(zhǎng)因子受體、血管緊張素及雌激素等，但具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚。由于高血壓及妊娠高血壓患者人數(shù)眾多，血壓水平與疾病的危險(xiǎn)程度又密切相關(guān)，因此，研究高血壓發(fā)病的分子機(jī)制，明確各類高血壓患者的致病機(jī)理，對(duì)于疾病的診斷及治療都具有重大的意義。

根據(jù)NCBI參考序列NM_006587.3中的記載，Corin基因全長(zhǎng)5015bp，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。從5’-端開始，第158至160位的ATG對(duì)應(yīng)起始密碼子，之前為157bp長(zhǎng)的5’-端非編碼區(qū)；第3284至3286位的TAA對(duì)應(yīng)終止密碼子，之后為1.7kb長(zhǎng)的3’-端非編碼區(qū)；5’-端非編碼區(qū)和3’-端非編碼區(qū)之間為3126bp長(zhǎng)的開放閱讀框架（ORF），用于編碼由1042個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)（分子量約為116kDa，下文中稱為Corin蛋白），如氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。Corin蛋白是一種II型跨膜絲氨酸蛋白酶（Transmembraneserineprotease），除含有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域、兩個(gè)卷曲結(jié)構(gòu)域、八個(gè)低密度脂蛋白受體結(jié)構(gòu)域和一個(gè)清道夫受體結(jié)構(gòu)域之外，還含有一個(gè)胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域。Corin蛋白主要表達(dá)于心臟，在調(diào)節(jié)血壓和心臟功能中起重要作用（參見(jiàn)Yan,W.,N.Sheng,etal.,J.Biol.Chem.,1999,274:14926-14935）。

發(fā)明內(nèi)容

為了進(jìn)一步明確Corin基因與高血壓及妊娠高血壓疾病之間的關(guān)系，本發(fā)明通過(guò)提供Corin基因的變異體來(lái)探究Corin基因中參與血壓調(diào)節(jié)的關(guān)鍵區(qū)域，并將之運(yùn)用于高血壓及妊娠高血壓疾病的早期預(yù)測(cè)及診斷，為患者的個(gè)性化治療提供依據(jù)。

具體而言，本發(fā)明提供了下列一種分離的Corin基因變異體，與核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的Corin基因相比，其具有下列變異中的任意一種：

（1）c.G1203A，其中第1203位堿基發(fā)生鳥嘌呤（G）→腺嘌呤（A）變異；

（2）c.C2753T，其中第2753位堿基發(fā)生胞嘧啶（C）→胸腺嘧啶（T）變異；

（3）c.C2928T，其中第2928位堿基發(fā)生胞嘧啶（C）→胸腺嘧啶（T）變異；

（4）c.G1747T，其中第1747位堿基發(fā)生鳥嘌呤（G）→胸腺嘧啶（T）變異。

另一方面，本發(fā)明提供了一種由上述分離的Corin基因變異體編碼的分離的多肽（其結(jié)構(gòu)如圖2所示），與氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的Corin蛋白相比，其具有下列變異中的任意一種：

（1）p.R349H，其中第349位氨基酸發(fā)生精氨酸（R）→組氨酸（H）變異；

（2）p.P866S，其中第866位氨基酸發(fā)生脯氨酸（P）→絲氨酸（S）變異；

（3）p.T924M，其中第924位氨基酸發(fā)生蘇氨酸（T）→甲硫氨酸（M）變異；

（4）p.R530S，其中第530位氨基酸發(fā)生精氨酸（R）→絲氨酸（S）變異。

最后一方面，本發(fā)明提供了上述分離的Corin基因變異體以及由其編碼的分離的多肽在制備高血壓診斷試劑和妊娠高血壓疾病（包括妊娠期高血壓、子癇前期、子癇、慢性高血壓并發(fā)子癇前期、妊娠合并慢性高血壓）診斷試劑中的用途。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，采用上述技術(shù)方案的本發(fā)明具備如下優(yōu)勢(shì)：