[發(fā)明專利]Y型含細胞的神經(jīng)導管制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610220890.6
• 申請日: 2016-04-03
• 公開（公告）號: CN107281548B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設計）人: 陳海萍
• 申請（專利權(quán)）人: 井岡山大學
• 主分類號: A61L27/22
• 分類號: A61L27/22;A61L27/16;A61L27/18;A61L27/38;A61L27/58
• 代理公司: 暫無信息
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1.Y型含細胞的神經(jīng)導管制備方法，神經(jīng)導管由可降解的高分子聚合物和細胞組成，利用生物3D打印擠出成形、細胞電紡絲和近場直寫復合工藝制備，包括以下步驟：

1)稱取15克明膠材料，在攪拌情況下緩緩加入到80克的去離子水中，至充分溶脹后升溫至80-100℃加速溶解，并保溫3小時制得均勻的高分子溶液，再經(jīng)100℃高溫蒸汽消毒，將消毒后的材料裝入噴頭二中備用；

2)稱取1.5克聚乙烯醇(PVA)材料，在攪拌情況下緩緩加入到15克的去離子水中，至充分溶脹后升溫至80-100℃加速溶解，并保溫3小時制得均勻的高分子溶液，再經(jīng)100℃高溫蒸汽消毒；

3)第4代人的細胞用0.25％的胰蛋白酶消化后收集在50mL離心管，1000r/min離心5min，棄上清液，將細胞懸液移至消毒后的PVA溶液攪拌均勻得到含細胞的PVA溶液，將其裝入噴頭三中備用；

4)稱取10克聚對二氧環(huán)己酮(PPDO)顆粒置于噴頭一加熱裝置中，將加熱裝置的溫控器溫度設為110℃對PPDO進行加熱，當溫度達到設定值時保溫2分鐘，噴頭一與接收平臺的距離為1.5mm，將材料以370μ L /min由微量泵提供的穩(wěn)定流量，進行連續(xù)擠出，同時接收平臺按照所構(gòu)建的Y型神經(jīng)導管模型沿X/Y方向進行規(guī)律運動，PPDO迅速固化成型，完成內(nèi)層神經(jīng)導管制備；

5)將固化成形后的內(nèi)層神經(jīng)導管安裝在旋轉(zhuǎn)裝置上，運動到噴頭二工位，噴頭與內(nèi)層神經(jīng)導管的外表面距離為0.5mm，將材料以400μ L /min由微量泵提供的穩(wěn)定流量，進行連續(xù)擠出，旋轉(zhuǎn)裝置一邊旋轉(zhuǎn)一邊移動，明膠材料包裹住PPDO并固化成形，完成中間層和內(nèi)層神經(jīng)導管制備；

6)旋轉(zhuǎn)裝置運動到噴頭三工位，噴頭三上加載8k V的直流電壓，噴頭和神經(jīng)導管之間的距離為5mm，負極加載在接收平臺上，將材料以180μ L /min由微量泵提供的穩(wěn)定流量，進行連續(xù)擠出，旋轉(zhuǎn)裝置一邊旋轉(zhuǎn)一邊移動，紡絲3個小時，在中間層神經(jīng)導管上沉積一層含細胞的納米纖維膜，完成神經(jīng)導管的整個制備。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Y型含細胞的神經(jīng)導管的制備方法，其特征在于：所述步驟3)的細胞為神經(jīng)干細胞或神經(jīng)元細胞。