[發明專利]一種基于表面修飾的磁性納米銀花基底的抗生素拉曼光譜檢測方法

有效

• 申請號: 201610220826.8
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN107290325B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 王升啟;李萍;肖瑞;汪崇文;李敏;榮振
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.基于表面修飾的磁性納米銀花基底的抗生素拉曼光譜檢測方法，其特征在于：

正己硫醇(C6)作為表面修飾劑，通過一步合成法，自組裝到磁性納米銀花的銀殼表面作為SERS增強基底；正己硫醇(C6)修飾的SERS基底在增強拉曼信號的同時，可以富集溶液中具有疏水基團的抗生素分子，使SERS基底表面能吸附更多的抗生素分子，從而獲得更強的抗生素分子的拉曼信號；利用此SERS基底對溶液和牛奶中抗生素進行了一系列定性定量檢測實驗；建立了一種簡單、高效、靈敏度高的針對食品中抗生素殘留分析的檢測方法；

具體包括如下步驟：

1)制備磁性納米銀花；

首先在200nm Fe₃O₄納米粒子外包覆一層SiO₂，并通過化學鍍的方法長出銀種子顆粒，最后通過甲醛和氨水在超聲條件下快速還原出花狀外殼；磁性納米銀花的外殼上凸起的銀棒是一種典型的納米尖端結構，具有很強的SERS增強性能；

2)用步驟1)制備好的磁性納米銀花溶于10mg/ml無水乙醇中，超聲10分鐘使其完全分散；加入若干微升配制好的10mM正己硫醇(C6)原液，使得終濃度為50μM；

3)將步驟2)得到的溶液超聲反應2小時，使正己硫醇(C6)完全自組裝于磁性納米銀花表面，用乙醇洗三次，保存于乙醇溶液中待用；

4)2種抗生素溶液樣品制備：將氯霉素和環丙沙星分別配制成1mg/ml的標準儲備液；隨后，采用10倍稀釋的方法制備濃度范圍從10^-3M～10^-12M的抗生素溶液，待用；

5)2種牛奶抗生素樣品制備：將步驟4)配制好的標準儲備液，加入牛奶依次10倍稀釋成10^-3～10^-10M的加標牛奶，用SPE固相萃取法進行純化富集，將洗脫液濃縮后待用；

6)將步驟3)得到的溶液分別加入步驟4)和步驟5)制備好的樣品中，利用便攜式拉曼光譜儀對樣品進行檢測；

7)根據抗生素的拉曼峰強度計算樣品回收率。

2.根據權利要求1所述的基于表面修飾的磁性納米銀花基底的抗生素拉曼光譜檢測方法，其特征在于：步驟3)中用乙醇清洗3遍，洗掉基底中的雜質和溶劑殘留物，保持基底干凈無雜質，4℃冰箱保存，待用。

3.根據權利要求1所述的基于表面修飾的磁性納米銀花基底的抗生素拉曼光譜檢測方法，其特征在于：步驟4)所述2種抗生素溶液的配制方法：取氯霉素1.1mg溶于1.1ml 80％乙醇中，制備得到1mg/ml的氯霉素乙醇溶液作為標準儲備液；環丙沙星1.2mg溶于1.2ml去離子水中，加入1.5μl甲酸，制備得到1mg/ml的環丙沙星酸性水溶液作為標準儲備液。

4.根據權利要求1所述的基于表面修飾的磁性納米銀花基底的抗生素拉曼光譜檢測方法，其特征在于：步驟(6)將制備好的Fe3O4@SiO₂-Ag-C6SERS基底用去離子水清洗2遍；加入300μl乙醇復溶；將300μl不同濃度的抗生素溶液和牛奶抗生素洗脫液，加入20μl Fe₃O₄@SiO₂-Ag-C6 SERS基底，配制各抗生素的溶劑和空白牛奶作為對照，室溫下超聲30分鐘，點在硅片上，進行拉曼檢測；便攜式拉曼光譜光譜儀型號為BWS465-785H9 B&W Tek公司，激發波長785nm，端口輸出功率為340mW，經40×物鏡聚焦后，光斑直徑為105μm，拉曼信號由冷卻溫度為-2℃的CCD接收，拉曼光譜均用硅片在520.7cm^-1處的拉曼峰來進行校正。

5.根據權利要求1所述的基于表面修飾的磁性納米銀花基底的抗生素拉曼光譜檢測方法，其特征在于：步驟(7)選用了未檢出2種待測抗生素的超市購買的牛奶樣品做加標回收試驗，在空白牛奶中分別加入1000、100和10μM/L的3個濃度的2種抗生素，然后用SPE固相萃取柱對牛奶中抗生素進行提取，提取液濃縮后，進行拉曼光譜檢測，然后根據抗生素的拉曼峰強度計算回收率。