[發明專利]用于診斷結核分枝桿菌感染的分子標志物、引物組及應用

有效

• 申請號: 201610213403.3
• 申請日: 2016-04-07
• 公開（公告）號: CN105671188B
• 公開（公告）日: 2020-01-24
• 發明（設計）人: 曾谷城
• 申請（專利權）人: 深圳月曜生命科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 44100 廣州新諾專利商標事務所有限公司
• 代理人: 曹愛紅

本發明供用于診斷結核分枝桿菌感染的新型分子標志物，分子標志物選自序列如SEQ ID NO.1～28所示的RNA中的一種或兩種以上的組合；或者，選自與SEQ ID NO.1～28所示的任何其中一種RNA的片段具有相同序列或者＞50％相同序列的RNA；或者是與SEQ ID NO.1～28所示的任何其中一種RNA全長或片段具有＞50％的RNA序列相似性的人工合成、拼接、重組或克隆的RNA。本發明還提供上述分子標注物的特異性引物組，及提供上述分子標志物及引物組的應用。序列如SEQ ID NO.1～28所示的RNA可以作為判別是否被結核分枝桿菌感染的特異分子標志物或診斷靶點，可應用于制備用于診斷結核分枝桿菌感染的制劑中。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及用于診斷結核分枝桿菌感染的分子標志物及在結核分枝桿菌感染診斷中的應用。

背景技術

結核病(Tuberculosis,TB)是因結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一種“高感染率”、“高致病率”與“高致死率”烈性傳染病。2015年世界衛生組織(WHO)發布的世界結核年報顯示，結核病的年致死人數達到150萬，已經超過因艾滋病或HIV感染所致死人數。中國是全球結核分枝桿菌攜帶人數最多、活動性結核病人最多以及結核耐藥疫情最為嚴重的國家之一。所以，迅速控制結核疫情蔓延迫在眉睫。

早期、快速、便捷診斷結核是控制結核病的一個關鍵環節。只有早期、快速、便捷、準確診斷出是否被結核分枝桿菌感染，才能為臨床治療用藥提供依據，才能為結核病控制部門采取及時、快速的公共衛生防控措施提供決策依據。

目前的結核分枝桿菌感染診斷技術主要包括有細菌學診斷與免疫學診斷。其中細菌學診斷包括結核分枝桿菌痰涂片抗酸染色、結核分枝桿菌培養、及痰標本的結核分枝桿菌特異核酸PCR檢測等。但是，基于痰標本抗酸染色、培養、PCR的結核分枝桿菌細菌學診斷技術嚴重依賴于結核病人排出的痰液里面必須有結核分枝桿菌。然而，有＞50％的結核感染病人因不排痰或者排的痰里面不含結核分枝桿菌所以無法在痰液里面檢測到結核分枝桿菌，而且結核分枝桿菌不僅培養周期非常漫長，往往需要3～6周，而且培養要求高。所以，結核分枝桿菌感染的細菌學診斷技術具有很大的局限性，存在診斷效率低、周期長、靈敏度低、技術復雜等缺陷，而且無法適用于臨床約＞50％的痰標本結核分枝桿菌陰性結核病人的診斷。

結核的免疫學診斷技術主要包括結核菌素皮試(TST)與IFN-γ釋放的ELISA或者ELISPOT檢測。結核菌素皮試(TST)的主要優點是價格相對低廉、適宜大規模結核感染人群的結核篩查。但是，結核菌素皮試(TST)的診斷缺乏結核分枝桿菌特異性，而且結核菌素皮試(TST)的結果非常容易受到機體免疫力與生理狀態的非特異性干擾。所以結核菌素皮試(TST)存在診斷特異性差、靈敏度低的致命缺點。基于結核分枝桿菌特異的IFN-γ釋放的ELISA或者ELISPOT檢測的結核免疫學診斷技術相比結核菌素皮試(TST)診斷技術有更高的特異性。但是，基于結核特異的IFN-γ釋放ELISA或者ELISPOT檢測的結核免疫學診斷技術需要專業的細胞培養實驗室對受試者的細胞進行培養，細胞培養實驗周期長，ELISPOT的數據讀出需要專業、昂貴的ELISPOT斑點讀出儀器，總體診斷價格昂貴，不適用于基層的結核早期、快速診斷，也不適合嬰幼兒的結核診斷。而且，大量的結核病人處于免疫抑制或紊亂狀態，IFN-γ的表達受到抑制或者處于紊亂的狀態，所以，基于結核特異的IFN-γ釋放的結核診斷技術存在技術上天然的缺陷。

因此，發現新的結核特異的診斷生物標記物，開發靈敏、方便、快捷、特異性高并且廉價的結核診斷新技術就成為了控制結核疫情蔓延的重要工作。

發明內容

為彌補現有技術的不足，本發明第一方面提供用于診斷結核分枝桿菌感染的新型分子標志物，所述分子標志物選自序列如SEQ ID NO.1～28所示的RNA中的一種或兩種以上的組合。