[發(fā)明專利]一種單個(gè)抗體分子原子力顯微鏡成像的樣品制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610213078.0
• 申請日: 2016-04-07
• 公開（公告）號: CN105699699B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周星飛;趙志杰;張萍;李賓;虞國凱;胡鈞;郝長春;楊家香
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海應(yīng)用物理研究所
• 主分類號: G01Q30/20
• 分類號: G01Q30/20
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 薛琦;沈利

1.一種單個(gè)抗體分子IgG原子力顯微鏡成像的樣品的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)將邊上偶聯(lián)有小分子抗原的DNA折紙與所述小分子抗原的抗體混合、反應(yīng)；所述小分子抗原包括偶聯(lián)在所述DNA折紙的邊上、相互之間距離為8～15納米的2個(gè)相同的小分子；

(2)將步驟(1)反應(yīng)所得的產(chǎn)物滴加到新解離的云母片上，吸附、上鏡、添加緩沖液，即制得所述單個(gè)抗體分子IgG的原子力顯微鏡成像的樣品。

2.如權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述小分子抗原在所述DNA折紙每邊上的數(shù)量為2～3個(gè)；和/或，所述小分子抗原的分子量為200～1000Da；和/或，所述小分子抗原為地高辛；和/或，所述小分子抗原包括距離為10～15納米的2個(gè)相同的小分子；和/或，所述DNA折紙為矩形或等邊三角形DNA折紙；和/或，所述DNA折紙的邊長為70～130納米；和/或，所述DNA折紙由單鏈腳手架鏈DNA和訂書釘單鏈DNA自組裝形成；和/或，所述小分子抗原的抗體和所述偶聯(lián)有小分子抗原的DNA折紙的摩爾比為1∶1。

3.如權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，所述單鏈腳手架鏈DNA為序列如SEQ IDNO.425所示的M13mp18；和/或，所述訂書釘單鏈DNA的核苷酸序列為如序列表中SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.208所示的DNA序列。

4.如權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于，所述訂書釘單鏈DNA的核苷酸序列中，偶聯(lián)有所述小分子的堿基為如序列表中SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.8、SEQ IDNO.37、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO.63、SEQ ID NO.93、SEQ ID NO.96、SEQ ID NO.73、SEQ IDNO.102、SEQ ID NO.130、SEQ ID NO.128、SEQ ID NO.158、SEQ ID NO.161、SEQ ID NO.138、SEQ ID NO.167、SEQ ID NO.195和SEQ ID NO.193所示序列的5’末端的堿基。

5.如權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，所述訂書釘單鏈DNA的核苷酸序列為如序列表中SEQ ID NO.209～SEQ ID NO.424所示的DNA序列。

6.如權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，所述訂書釘單鏈DNA的核苷酸序列中，偶聯(lián)有小分子的堿基為如序列表中SEQ ID NO.209、SEQ ID NO.340、SEQ ID NO.260、SEQ IDNO.284、SEQ ID NO.283、SEQ ID NO.307、SEQ ID NO.389、SEQ ID NO.413、SEQ ID NO.412和SEQ ID NO.388所示序列的5’末端堿基。

7.如權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述步驟(1)反應(yīng)所得的產(chǎn)物的體積為3～5微升；和/或，所述吸附的時(shí)間為3分鐘；和/或，所述緩沖液為TAE緩沖液；和/或，所述緩沖液的體積為30微升。