[發(fā)明專利]一種制備復(fù)合結(jié)構(gòu)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610212843.7
• 申請日: 2016-04-07
• 公開（公告）號: CN106606804B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康裕建;左瀟
• 申請（專利權(quán)）人: 四川藍(lán)光英諾生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/40;A61L27/58;A61L27/54;A61L27/50;A61L27/24;A61L27/20;A61L27/18;C12Q1/02;G01N33/50
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 林遠(yuǎn)成

1.一種制備包含m種細(xì)胞的復(fù)合結(jié)構(gòu)的方法，其中，m為≥2的整數(shù)，所述方法包括：

(1)提供m種包含細(xì)胞的微囊，其中，每種微囊各自對應(yīng)于復(fù)合結(jié)構(gòu)中的一種細(xì)胞，即，每種微囊各自包含復(fù)合結(jié)構(gòu)中的一種細(xì)胞，和/或能夠分化為復(fù)合結(jié)構(gòu)中的該種細(xì)胞的干細(xì)胞；

(2)提供所述復(fù)合結(jié)構(gòu)的細(xì)胞分布信息；

(3)基于所述復(fù)合結(jié)構(gòu)的細(xì)胞分布信息，通過生物打印對所述m種微囊進(jìn)行排布，以制備構(gòu)建體；

(4)培養(yǎng)步驟(3)獲得的構(gòu)建體，產(chǎn)生所述復(fù)合結(jié)構(gòu)；

所述微囊包含細(xì)胞，和包裹所述細(xì)胞的核層，其中所述核層由生物可降解材料制成；

所述微囊還包含封裝所述核層的殼層，其中所述殼層由生物可降解材料制成；

所述殼層各自獨(dú)立地具有0.01-0.4GPa的硬度以及0.01-100MPa的彈性模量，所述殼層的厚度各自獨(dú)立地為2-50μm。

2.權(quán)利要求1的方法，所述復(fù)合結(jié)構(gòu)的m種細(xì)胞是由同一種干細(xì)胞分化而來的，并且，步驟(1)所述的m種微囊都包含所述干細(xì)胞，并且每種微囊各自包含誘導(dǎo)所述干細(xì)胞分化為復(fù)合結(jié)構(gòu)中的一種細(xì)胞的誘導(dǎo)因子。

3.權(quán)利要求1或2的方法，所述干細(xì)胞是MSC細(xì)胞。

4.一種制備包含骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的復(fù)合結(jié)構(gòu)的方法，所述方法包括：

(1)提供兩種包含細(xì)胞的微囊，其中，第一微囊包含MSC細(xì)胞，以及誘導(dǎo)MSC向成骨細(xì)胞或骨細(xì)胞分化的誘導(dǎo)因子；并且，第二微囊包含MSC細(xì)胞，以及誘導(dǎo)MSC向成軟骨細(xì)胞或軟骨細(xì)胞分化的誘導(dǎo)因子；

(2)提供包含骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的復(fù)合結(jié)構(gòu)的細(xì)胞分布信息；

(3)基于所述復(fù)合結(jié)構(gòu)的細(xì)胞分布信息，通過生物打印對所述第一微囊和第二微囊進(jìn)行排布，以制備構(gòu)建體；

(4)培養(yǎng)步驟(3)獲得的構(gòu)建體，產(chǎn)生所述復(fù)合結(jié)構(gòu)；

所述第一微囊包括：MSC細(xì)胞，包裹所述MSC細(xì)胞的核層，和，封裝所述核層的殼層；所述核層和殼層各自獨(dú)立地由生物可降解材料制成，并且所述核層包含誘導(dǎo)MSC向成骨細(xì)胞或骨分化的誘導(dǎo)因子；所述殼層具有0.01-0.4GPa的硬度以及0.01-100MPa的彈性模量，所述殼層的厚度為2-50μm；

所述第二微囊包括：MSC細(xì)胞，包裹所述MSC細(xì)胞的核層，和，封裝所述核層的殼層，其中所述核層和殼層各自獨(dú)立地由生物可降解材料制成，并且所述核層包含誘導(dǎo)MSC向成軟骨細(xì)胞或軟骨分化的誘導(dǎo)因子；所述殼層具有0.01-0.4GPa的硬度以及0.01-100MPa的彈性模量，所述殼層的厚度為2-50μm。

5.權(quán)利要求4的方法，所述方法具有以下特征中的一個(gè)或多個(gè)：

(1)所述第一微囊的殼層包含誘導(dǎo)MSC向成骨細(xì)胞或骨分化的誘導(dǎo)因子；

(2)所述第一微囊的殼層不包含細(xì)胞；

(3)所述第二微囊的殼層包含誘導(dǎo)MSC向成軟骨細(xì)胞或軟骨分化的誘導(dǎo)因子；

(4)所述第二微囊的殼層不包含細(xì)胞。

6.權(quán)利要求4或5的方法，所述誘導(dǎo)MSC向成骨細(xì)胞或骨分化的誘導(dǎo)因子包含地塞米松、抗壞血酸和甘油磷酸。

7.權(quán)利要求4或5的方法，所述誘導(dǎo)MSC向成軟骨細(xì)胞或軟骨分化的誘導(dǎo)因子包含TGF-β3、地塞米松、2-磷酸抗壞血酸、丙酮酸鈉、脯氨酸和胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒溶液。