[發明專利]一種以竹筍殼降解產物為誘導劑培養霉菌生產纖維素酶的方法

有效

• 申請號: 201610208567.7
• 申請日: 2016-04-06
• 公開（公告）號: CN105647890B
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 章建國;魏兆軍;胡飛
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/685
• 代理公司: 合肥金安專利事務所(普通合伙企業) 34114
• 代理人: 金惠貞

1.一種以竹筍殼降解產物為誘導劑培養霉菌生產纖維素酶的方法，其特征在于操作步驟如下：

（1）用竹筍殼制作誘導劑

（1.1）竹筍殼干粉過40目篩，按重量比4:1將竹筍殼干粉和麩皮混和，再加入干物質重量2倍的自來水拌勻，滅菌，制成發酵底料；

（1.2）在發酵底料中接入平菇菌種，接種量為發酵底料重量的5%，溫度28±2℃條件下，培養15 d，當菌絲長密長實，發酵完成；發酵底料中的竹筍殼干粉被部分降解，成為平菇發酵料；

（1.3）將平菇發酵料在80℃溫度下烘干至恒重，粉碎，得到纖維素酶誘導粉劑；

（1.4）將纖維素酶誘導粉劑和自來水按重量比1:10混和，加熱，沸水浸提20 min，靜置冷卻，取上層清液蒸發濃縮制成纖維素酶誘導水劑，纖維素酶誘導水劑的體積是原液體積的1/10；

（2）配制霉菌液體發酵培養基，培養基配方如下：

葡萄糖2.0 g、氯化鈉0.05 g、磷酸二氫鉀0.1 g、七水硫酸鎂0.05 g、硫酸銨0.2 g、纖維素酶誘導水劑10 mL和水90 mL；

（3）霉菌好氧發酵

在霉菌液體發酵培養基中接入黑曲霉孢子懸液，好氧恒溫發酵，得到發酵液；

霉菌好氧發酵的工藝條件：搖瓶發酵時，100 mL霉菌液體發酵培養基中接入濃度（1.10～1.20）×10⁶個/mL 的1 mL黑曲霉孢子懸液，恒溫搖床培養；轉速180 r/min、溫度32℃、發酵時間72 h；

（4）發酵液后處理

將發酵液經過濾或離心處理，分離出其中的菌絲球，所得清液中纖維素酶活不低于4U/mL，將清液濃縮，-40℃真空冷凍干燥48 h，制成纖維素酶粉劑；或室溫下真空杯過濾濃縮，濾膜透過分子量小于500 Da，制成纖維素酶濃縮液。

2.根據權利要求1所述的一種以竹筍殼降解產物為誘導劑培養霉菌生產纖維素酶的方法，其特征在于：步驟（3）中霉菌好氧發酵的工藝條件：5 L發酵罐發酵時，2 L霉菌液體發酵培養基中接入濃度（1.10～1.20）×10⁶個/mL 的20 mL黑曲霉孢子懸液，攪拌轉速800 r/min、通氣量0.5 L/min、溫度32℃、發酵時間72 h。