[發明專利]一種公石松組織培養方法

有效

• 申請號: 201610205226.4
• 申請日: 2016-04-05
• 公開（公告）號: CN105766647B
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 林成輝;廖琳琳
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于生物細胞組織克隆技術，利用現代生物技術快繁公石松，具體涉及一種公石松組織培養方法。

背景技術

公石松：蘭科植物血葉蘭 Ludisia discolor ( Ker-Gawl. ) A. Rich.，別名異色血葉蘭、石蠶、石上藕、石面蓮等，是閩南民間頗具地方特色的一味草藥。該藥應用歷史悠久，藥效確切，應用普遍。其味甘、微澀、性涼，具有清熱涼血、生津降火、利水通絡、止咳等功效，可用于治療高燒不退、咽喉腫痛、無名腫痛、脾胃病和炎癥等。《中華本草》記載其功效：“潤肺、健脾、安神，主治肺結核咳血、神經衰弱、食欲不振”。國內主要分布于閩、粵、瓊等沿海一帶熱帶地區，因其常常生長在陰濕的巖石縫中，故取名為“公石松”。公石松對生長環境要求較苛刻，自然繁殖力差。其根狀莖發達，肉質而肥厚，似蓮藕狀，節上生根，根多具濃密根毛。肉質莖含有較豐富的內生菌，對殺菌劑反應敏感，容易變色，組織培養沒有較權威的成熟技術可以參考，現未查到有關公石松組織培養的報道。本發明以野生公石松為外植體組織培養公石松種苗，從而更好地開發利用公石松的藥用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種公石松組織培養方法，以野生公石松為外植體組織培養公石松種苗，從而更好地開發利用公石松的藥用價值。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種公石松組織培養方法，包括如下：

（1）以野生公石松為外植體經過2—3天凈沙培植，去除根葉的莖段，經表面清洗后，放在 1wt.% 次氯酸鈉溶液浸泡 15 分鐘，用自來水沖洗干凈，放入75％v/v 酒精中滅菌 30 秒，再以0.1wt.％ 升汞滅菌 7 ~ 10 分鐘，用無菌水沖洗 4 ~ 5 次；

（2）在無菌條件下，將莖切成 l.5cm長莖節段，接種到誘導培養基上，每天連續光照 8 h ，光照強度1500 ~2 000 lx，培養溫度23±1 ℃，培養150天；

（3）繼代培養；誘導培養基上形成的莖芽在無菌條件下移接到生長培養基，每天連續光照12h，光照強度2000 ~ 2500 lx，培養溫度25±1℃，培養130天，形成具有比較完整根系和莖、葉。

所述的誘導培養基為：MS基本培養基中附加IBA 1.0m g/L、NAA 0.5m g/L、KT 0.1m g/L、白糖10g/L、土豆10 g/L。

所述生長培養基為1/2 MS 基本培養基中附加NAA 0.5m g/L、IBA 0.1m g/L 、和納米氧化硅1g/L、白糖15g/L、土豆10 g/L、蛋白胨1.5g/L。

本發明的優點在于：本發明以野生公石松為外植體建立無菌體系，經過誘導培養和繼代培養。此技術體系克服肉質莖內生菌多，容易變色困難。繼代培養階段形成的種苗粗壯，根、莖、葉分化較完整（如圖1），根部活力強。，種植時發根快，成活率高(成活率在90%以上)，，生長快、成色好。該發明實現了無菌條件下的種苗快繁，從而解決了公石松自然繁殖力差所導致的自然界野生資源匱乏的問題。此技術體系的建立讓這具有悠久應用歷史、藥效確切的中草藥更好地開發利用，填補了公石松組織培養的空白。

附圖說明

圖1 組織培養苗。

圖2 移植土壤的苗。

圖3 組織培養苗形成的花蕾。

圖4在土壤中形成的強活力根系。

具體實施方式

實施例1

一種公石松組織培養方法，包括如下：

（1）以野生公石松為外植體經過2天凈沙培植，去除根葉的莖段，經表面清洗后，放在 1wt.% 次氯酸鈉溶液浸泡 15 分鐘，用自來水沖洗干凈，放入75％v/v 酒精中滅菌 30 秒，再以0.1wt.％ 升汞滅菌 7分鐘，用無菌水沖洗 4次；

（2）在無菌條件下，將莖切成 l.5cm長莖節段，接種到誘導培養基上，每天連續光照 8 h ，光照強度1500 lx，培養溫度23±1 ℃，培養150天；

（3）繼代培養；誘導培養基上形成的莖芽在無菌條件下移接到生長培養基，每天連續光照12h，光照強度2000lx，培養溫度25±1℃，培養130天，形成具有比較完整根系和莖、葉。

所述的誘導培養基為：MS基本培養基中附加IBA 1.0m g/L、NAA 0.5m g/L、KT 0.1m g/L、白糖10g/L、土豆10 g/L。