[發(fā)明專利]一種人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病動(dòng)物模型制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610202543.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-31
• 公開（公告）號(hào): CN105748531A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊翠;呂茂杰;楊保收;付旭彬;梁武;李守軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/74
• 分類號(hào): A61K35/74;A61K49/00
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 李明卓

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及傳染病防治技術(shù)領(lǐng)域，進(jìn)一步涉及人類傳染病動(dòng)物模型的建立方法，具體涉及一種人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病動(dòng)物模型制備方法。

背景技術(shù)

鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)屬于沙門氏菌B群，是一群非適應(yīng)性或泛嗜性的沙門氏菌，具有廣泛的宿主。鼠傷寒沙門氏菌能引起各種家禽和哺乳動(dòng)物的傳染病，也可引起人類感染，其臨床表現(xiàn)可分為四型，即胃腸炎型、敗血癥型、病灶感染型和無癥狀帶菌型。其中胃腸炎型最常見，約占80％。潛伏期8～24小時(shí)，發(fā)病較急，主要癥狀為發(fā)熱、腹瀉、厭食、嘔吐、腹痛、腹脹等，大便次數(shù)增多，嚴(yán)重者每日可達(dá)數(shù)十次，大便性狀多樣易變，為黃綠色或深綠色水樣、粘液樣或膿血便。新生兒可間歇排出白色膠凍樣便，重癥腹瀉患兒可迅速出現(xiàn)脫水、電解質(zhì)紊亂和酸中毒，甚至發(fā)生休克。大便顯微鏡檢查可見多數(shù)白細(xì)胞和紅細(xì)胞。絕大多數(shù)病人大便可培養(yǎng)出鼠傷寒沙門氏菌，為確診鼠傷寒的主要依據(jù)。

由于該疾病癥狀復(fù)雜，而且與其他傳染性腸道疾病存在相似的臨床表現(xiàn)，因此診斷較為困難；而且由于患病人群多為小兒，因此治療手段受到一定的限制，再加之不同患者間癥狀差異較大，因此相關(guān)治療方法普適性較低，療效難以保證。在這種情況下，為獲得更好的治療手段，現(xiàn)有技術(shù)的研究者嘗試建立動(dòng)物模型作為研究對(duì)象。在此環(huán)節(jié)中，首先，所建立的動(dòng)物模型應(yīng)當(dāng)與人類該疾病的病理特征盡可能相似；此外，造模方法應(yīng)當(dāng)具有良好的可重復(fù)性；同時(shí)，動(dòng)物模型作為該疾病研究對(duì)象的性能指標(biāo)應(yīng)當(dāng)明確，并具有確切的評(píng)價(jià)方法。然而現(xiàn)有技術(shù)的造模方法普遍存在缺陷：在動(dòng)物與病原微生物的接觸過程中難以保證得到胃腸炎分型，同時(shí)又缺乏明確的篩選手段，因此所得的病患動(dòng)物很可能不具有人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病的病理特征、無法作為該疾病的研究對(duì)象。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病動(dòng)物模型制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)的造模方法難以保證獲得可用動(dòng)物模型的技術(shù)問題。

本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)的人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病動(dòng)物模型造模方法可重復(fù)性較低。

為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病動(dòng)物模型制備方法，包括以下步驟：

1)取體重13～16g、3～5周齡的小鼠，以濃度為0.5～1.5×10⁹cfu/mL的鼠傷寒沙門氏菌菌液灌胃處理，每次灌胃280～320uL菌液，每天灌胃2次，持續(xù)3天；每次灌胃前小鼠禁食不禁水2小時(shí)；

2)步驟1)結(jié)束后，在所述小鼠中選取：較步驟1)開始前體重下降10％以上、且較步驟1)開始前血清中IL-6含量升高50％以上、且較步驟1)開始前血清中IL-10含量升高100％以上的個(gè)體，即為所述人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病動(dòng)物模型。

作為優(yōu)選，所述小鼠的品種是昆明小鼠。

作為優(yōu)選，步驟2)中所述個(gè)體還滿足以下條件：其小腸組織中IL-6含量較步驟1)開始前升高200％以上、且其小腸組織中MPO含量較步驟1)開始前下降30％以上。

作為優(yōu)選，步驟2)中所述個(gè)體還滿足以下條件：其血清中白細(xì)胞含量較步驟1)開始前升高100％以上、且其血清中中性粒細(xì)胞含量較步驟1)開始前升高100％以上、且其血清中淋巴細(xì)胞含量較步驟1)開始前升高50％以上、且其血清中單核細(xì)胞含量較步驟1)開始前升高50％以上。

作為優(yōu)選，步驟2)中所述個(gè)體還可以滿足以下任一條件：精神倦怠；毛色失去光澤；腹瀉；體重下降；小腸充氣腸壁變薄；腸管內(nèi)充滿黃色稀薄的內(nèi)容物。

在以上技術(shù)方案中，采用病原微生物直接灌胃的方式進(jìn)行造模，操作方式較為簡(jiǎn)便；在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步針對(duì)病原微生物濃度、接觸量以及接觸頻次進(jìn)行了創(chuàng)新性設(shè)計(jì)，有效提升了疾病模型效果。此外，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)當(dāng)接觸病菌前控制小鼠的進(jìn)水、進(jìn)食狀況一方面能夠促進(jìn)鼠傷寒病向胃腸炎分型發(fā)展，同時(shí)有助于統(tǒng)一動(dòng)物模型的病理反應(yīng)。本發(fā)明以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募夹g(shù)構(gòu)思實(shí)現(xiàn)了突出的技術(shù)效果，同時(shí)成本較低、易于實(shí)現(xiàn)，因此具有良好的應(yīng)用前景，為人患鼠傷寒沙門氏菌腸炎病的臨床用藥提供了可靠的研究對(duì)象。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中模型組小鼠與正常組小鼠平均體重變化圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中正常組小鼠小腸組織HE染色圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例1中模型組小鼠小腸組織HE染色圖。

具體實(shí)施方式