[發明專利]一種酶法制備甾體消炎藥醋酸潑尼松龍的方法

在審

• 申請號: 201610202502.1
• 申請日: 2016-04-05
• 公開（公告）號: CN105779552A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 梁曉亮;李國慶
• 申請（專利權）人: 蘇州漢酶生物技術有限公司
• 主分類號: C12P33/02
• 分類號: C12P33/02
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛

技術領域

本發明涉及生物化工技術領域，尤其涉及一種酶法制備甾體消炎藥醋酸潑尼松龍 的方法。

背景技術

醋酸潑尼松龍(化合物1，又名Prednisoloneacetate)是一種重要的腎上腺糖皮 質激素類藥品，主要用于過敏性與自身免疫性炎癥疾病，膠原性疾病。如風濕病、類風濕性 關節炎、紅斑狼瘡、嚴重支氣管哮喘、腎病綜合癥、血小板減少性紫癜、粒細胞減少癥、急性 淋巴性白血病、各種腎上腺皮質功能不足癥、剝脫性皮炎、無皰瘡神經性皮炎、類濕疹等。

目前，醋酸潑尼松龍可由潑尼松龍酯化得到(CN201510115790)，其他的合成工藝 有微生物轉化和化學合成兩類方法，常見的路線如下:

1.化學合成方法，例如中國專利CN200710061258、CN201310348000和CN 201310348285等，步驟繁瑣，采用重金屬催化劑和大量有機溶劑，經過多次進行分離，操作 復雜，收率低，不利于大規模工業化生產。

2.醋酸氫化可的松微生物脫氫，例如用節桿菌(CN200710060202)，產朊假絲酵母 (CN201110374477)等。微生物轉化法轉化率較低，一般不超過70％，轉化周期長(大于60小 時)，轉化后提取純化困難，結果不穩定。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種酶法制備甾體消炎藥醋酸潑尼松 龍的方法，該方法底物濃度高、酶用量少。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：一種酶法制備甾體消炎藥醋酸潑尼 松龍的方法，以化合物2為底物，該底物在氫受體、助溶劑、甾體1,2脫氫酶的存在下發生反 應生成目標產物醋酸潑尼松龍，所述反應在pH為5～9、溫度為10～45℃的水相緩沖溶液中 進行，其中，所述的助溶劑為二甲基亞砜、吐溫-60、TritonX-100、聚乙二醇中的一種或多 種的組合，且助溶劑的投料體積為反應體系總體積的5～20％，所述的化合物2的結構式如 下：

優選地，所述的氫受體為甲萘醌、萘醌中的一種或二者的組合。

優選地，所述氫受體與底物的投料質量比為10～1:1。

優選地，所述的助溶劑為二甲基亞砜與吐溫-60二者的組合。

優選地，所述的甾體1,2脫氫酶為購自蘇州漢酶生物技術有限公司的牌號為 EW1147的甾體1,2脫氫酶。

優選地，所述的水相緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。

優選地，反應過程中的pH控制在7.0～8.0。

優選地，具體實施過程如下：將所述的底物、氫受體、助溶劑、甾體1,2脫氫酶加入 到反應器中，在pH為5～9、溫度為10～45℃的水相緩沖溶液中進行反應，HPLC檢測反應進 程，反應完全后，再對產物依次進行離心、洗滌沉淀、過濾、旋蒸處理。

由于上述技術方案的運用，本發明與現有技術相比具有下列優點：

1)解決了現有技術中采用化學合成法制備醋酸潑尼松龍過程中，步驟繁瑣、收率 低、需采用重金屬催化劑和大量有機溶劑所帶來的環境問題；

2)解決了現有技術中采用微生物轉化法制備醋酸潑尼松龍過程中，轉化率低、轉 化周期長、轉化后提純困難、不穩定的問題；

3)本發明所采用的酶法制備醋酸潑尼松龍過程中，底物濃度高，酶用量少、收率 高、純度好，具有重要的應用價值。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細的說明，但本發明并不限于以下實施 例。實施例中采用的實施條件可以根據具體使用的不同要求做進一步調整，未注明的實施 條件為常規實驗中的條件。

實施例1(酶的篩選)：

將化合物210mg，加入到1.55mLpH7.0磷酸鹽緩沖溶液中，而后加入200μl質量 分數為10％的DMSO，100μl質量分數為5％的Tween-60，150μl60mg/ml的甲萘醌水溶液，并 加入甾體1,2脫氫酶(購自蘇州漢酶生物技術有限公司)10mg，于30℃震蕩2h，檢測轉化率， 如表1。

表1