[發明專利]一種間充質干細胞培養試劑盒

在審

• 申請號: 201610202349.2
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105779385A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 谷超
• 申請（專利權）人: 谷超
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所 43205
• 代理人: 許伯嚴

技術領域

本發明屬于干細胞培養領域，具體涉及一種間充質干細胞培養試劑盒。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymalstemcells，MSC)是干細胞家族的重要成員，來源于發育 早期的中胚層和外胚層。MSC最初在骨髓中發現，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進 干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注。如間充質干細胞在體內或 體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、心肌、 內皮等多種組織細胞，連續傳代培養和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子 細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。

間充質干細胞包括臍帶間充質干細胞和骨髓間充質干細胞。

臍帶間充質干細胞是一類具有自我更新、增殖和多向分化潛能的干細胞，具有來源廣泛、 易于采集、保存和運輸、無異體排斥、避免倫理爭議等諸多優點。流式細胞儀分析發現臍帶 間充質干細胞高表達間質細胞標志(CD44、CD105)、整合素受體(CD29、CD49b、CD49c、 CD51)、不表達造血系標志(CD34、CD45)白細胞抗原HLA-DR和內皮細胞標志CD31。 臍帶間充質干細胞在體內外可以分化為骨細胞、軟骨細胞、肝細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞 以及神經元細胞等。目前人臍帶間充質干細胞在組織工程骨、人工血管以及基因治療等臨床 應用研究中已逐漸深入，并已顯示出廣闊的應用前景。目前，對臍帶間充質干細胞的分離培 養、擴增還沒有統一的標準，存在純度低、原代培養時間長等缺點。各種類型的成纖維成體 干細胞擴增一般在2～3天開始進入指數式生長，相差不大，而原代細胞由于組織來源不同， 出現細胞克隆時間差異較大，所以，原代細胞傳代時間是分離得到目的細胞的關鍵。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種能夠提高間充質干細胞原代細胞傳代 時間的培養試劑盒，以使間充質干細胞多次傳代后依然保持有細胞全能性。

本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：

一種間充質干細胞培養試劑盒，包括細胞培養液A和細胞培養液B；

所述細胞培養液A為含80～120ng/ml細胞因子LIF、80～120ng/ml細胞因子bFGF和 20～30μg/mlCephaloziellinN的Knockout-DMEM培養基；

所述細胞培養液B為胎牛血清。

進一步地，所述細胞培養液A為含100ng/ml細胞因子LIF、100ng/ml細胞因子bFGF和 25μg/mlCephaloziellinN的Knockout-DMEM培養基。

進一步地，所述間充質干細胞為臍帶間充質干細胞。

進一步地，所述間充質干細胞為骨髓間充質干細胞。

進一步地，所述細胞培養液A和細胞培養液B均為無菌，并各自獨立包裝。

進一步地，所述的間充質干細胞培養試劑盒還包括細胞洗滌液和細胞消化液；所述細胞 洗滌液為生理鹽水；所述細胞消化液為CollagenaseII水溶液。

進一步地，所述細胞消化液為濃度為0.2g/100ml的CollagenaseII水溶液。

進一步地，所述生理鹽水由氯化鈉和水組成，氯化鈉的濃度為0.9g/100ml。

進一步地，所述細胞培養液A、細胞培養液B、細胞洗滌液和細胞消化液均為無菌，并 各自獨立包裝。

上述間充質干細胞培養試劑盒在間充質干細胞培養中的應用。

本發明的優點：

本發明提供的培養試劑盒能夠提高間充質干細胞原代細胞傳代時間，使間充質干細胞多 次傳代后依然保持有細胞全能性。

具體實施方式

下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范圍。盡 管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明 的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。

本發明化合物CephaloziellinN的制備方法參見文獻：SecondaryMetabolitesfromthe ChineseLiverwortCephaloziellakiaeri,J.Nat.Prod.2013,76,1700-1708。

實施例1：試劑盒的制備

1、組分的制備