[發(fā)明專利]間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610201894.X
• 申請(qǐng)日: 2016-03-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105713872A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙順英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 趙順英
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 長(zhǎng)沙星耀專利事務(wù)所 43205
• 代理人: 許伯嚴(yán)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSC)是干細(xì)胞家族的重要成員，來(lái)源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。MSC最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。如間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細(xì)胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。

間充質(zhì)干細(xì)胞包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有自我更新、增殖和多向分化潛能的干細(xì)胞，具有來(lái)源廣泛、易于采集、保存和運(yùn)輸、無(wú)異體排斥、避免倫理爭(zhēng)議等諸多優(yōu)點(diǎn)。流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞高表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志(CD44、CD105)、整合素受體(CD29、CD49b、CD49c、CD51)、不表達(dá)造血系標(biāo)志(CD34、CD45)白細(xì)胞抗原HLA-DR和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD31。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)外可以分化為骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞以及神經(jīng)元細(xì)胞等。目前人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程骨、人工血管以及基因治療等臨床應(yīng)用研究中已逐漸深入，并已顯示出廣闊的應(yīng)用前景。目前，對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、擴(kuò)增還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，存在純度低、原代培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)。各種類型的成纖維成體干細(xì)胞擴(kuò)增一般在2～3天開(kāi)始進(jìn)入指數(shù)式生長(zhǎng)，相差不大，而原代細(xì)胞由于組織來(lái)源不同，出現(xiàn)細(xì)胞克隆時(shí)間差異較大，所以，原代細(xì)胞傳代時(shí)間是分離得到目的細(xì)胞的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種能夠提高間充質(zhì)干細(xì)胞原代細(xì)胞傳代時(shí)間的培養(yǎng)試劑盒，以使間充質(zhì)干細(xì)胞多次傳代后依然保持有細(xì)胞全能性。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，包括細(xì)胞培養(yǎng)液A和細(xì)胞培養(yǎng)液B；

所述細(xì)胞培養(yǎng)液A為含80～120ng/ml細(xì)胞因子LIF、80～120ng/ml細(xì)胞因子bFGF和20～30μg/mlGranulodieneA的Knockout-DMEM培養(yǎng)基；

所述細(xì)胞培養(yǎng)液B為胎牛血清。

進(jìn)一步地，所述細(xì)胞培養(yǎng)液A為含100ng/ml細(xì)胞因子LIF、100ng/ml細(xì)胞因子bFGF和25μg/mlGranulodieneA的Knockout-DMEM培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

進(jìn)一步地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

進(jìn)一步地，所述細(xì)胞培養(yǎng)液A和細(xì)胞培養(yǎng)液B均為無(wú)菌，并各自獨(dú)立包裝。

進(jìn)一步地，所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒還包括細(xì)胞洗滌液和細(xì)胞消化液；所述細(xì)胞洗滌液為生理鹽水；所述細(xì)胞消化液為CollagenaseII水溶液。

進(jìn)一步地，所述細(xì)胞消化液為濃度為0.2g/100ml的CollagenaseII水溶液。

進(jìn)一步地，所述生理鹽水由氯化鈉和水組成，氯化鈉的濃度為0.9g/100ml。

進(jìn)一步地，所述細(xì)胞培養(yǎng)液A、細(xì)胞培養(yǎng)液B、細(xì)胞洗滌液和細(xì)胞消化液均為無(wú)菌，并各自獨(dú)立包裝。

上述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒在間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供的培養(yǎng)試劑盒能夠提高間充質(zhì)干細(xì)胞原代細(xì)胞傳代時(shí)間，使間充質(zhì)干細(xì)胞多次傳代后依然保持有細(xì)胞全能性。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。

本發(fā)明化合物GranulodieneA的制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)：SesquiterpenesfromthesaprotrophicfungusGranulobasidiumvellereum(Ellis&Cragin)Jülich,Phytochemistry102(2014)197-204。

實(shí)施例1：試劑盒的制備

1、組分的制備

細(xì)胞洗滌液的制備：將9gNaCl溶于去離子水并用去離子水定容至1000ml，高壓滅菌后置于4℃冰箱內(nèi)備用。