[發明專利]一種提取擬南芥種子中總RNA的方法在審
| 申請號： | 201610201835.2 | 申請日： | 2016-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN105671032A | 公開（公告）日： | 2016-06-15 |
| 發明（設計）人： | 甘銀波;吳敏潔;顏安;盛喆承;于濤 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提取 擬南芥 種子 rna 方法 | ||
1.一種提取擬南芥種子中總RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)在液氮冷卻條件下研磨擬南芥種子，得擬南芥種子凍干粉；
(2)將擬南芥種子凍干粉加入到預熱的提取緩沖液中，再加入β-巰基乙醇，渦旋混合，離 心，吸取上清液，得第一離心上清液；
(3)第一離心上清液中加入氯仿和水飽和酚，渦旋混勻，18～25℃條件下離心，吸取上清液， 得第二離心上清液；
(4)第二離心上清液中加入氯化鋰，靜置，離心，得第一離心沉淀；
(5)用DEPC水溶解第一離心沉淀，加乙酸鈉和異丙醇，靜置，離心，得第二離心沉淀；
(6)將第二離心沉淀經醇洗，干燥，復溶即得所述擬南芥種子總RNA。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取緩沖液的成分為：100mMTris-HCl， 10mMEDTA，2％十二烷基硫酸鋰，0.6MNaCl，0.4M檸檬酸三鈉。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，每百毫克擬南芥種子凍干粉中加 入提取緩沖液1～3mL，β-巰基乙醇50～150μL。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，提取緩沖液的預熱溫度為40～60℃。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，渦旋振蕩1～2min。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，氯仿添加量為1倍體積的第一離 心上清液，水飽和酚添加量為1倍體積的第一離心上清液。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述氯化鋰的終濃度為2～3M。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，-80℃條件下靜置15min～2h。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，所述乙酸鈉的終濃度為0.15～0.3M。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)和(5)中，離心的條件為18～25℃。
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