[發(fā)明專利]一種用于檢測牛布魯菌病的ELISPOT檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610201618.3
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105759054B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 焦新安;陳祥;徐正中;孟闖;劉佳瑩;潘志明;孫林
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)11017
• 代理人: 韓登營

1.一種用于檢測牛布魯菌病ELISPOT檢測試劑盒，所述ELISPOT檢測試劑盒包括：支持介質(zhì)、捕獲抗體、檢測抗體、陰性對照和陽性對照、特異性刺激劑，其中，所述捕獲抗體為第一牛γ干擾素單克隆抗體，所述檢測抗體為經(jīng)過標記的第二牛γ干擾素單克隆抗體，特異性刺激劑為布魯菌素Br-PPD；

其中，所述支持介質(zhì)與試劑接觸面上有微孔濾膜；所述捕獲抗體包被在支持介質(zhì)上或所述捕獲抗體與支持介質(zhì)分別放置；以及

所述捕獲抗體與所述檢測抗體能與牛γ干擾素共同發(fā)生抗原抗體結(jié)合作用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其中，所述第一牛γ干擾素單克隆抗體為牛γ干擾素單克隆抗體2G5，所述牛γ干擾素單克隆抗體2G5由保藏號為CCTCC NO：C2012107的雜交瘤細胞株2G5或其傳代細胞株分泌產(chǎn)生；以及

所述第二牛γ干擾素單克隆抗體為牛γ干擾素單克隆抗體5E11，所述牛γ干擾素單克隆抗體5E11由保藏號為CCTCC NO：C2012108的雜交瘤細胞株5E11或其傳代細胞株分泌產(chǎn)生。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其中，所述標記包括生物素標記或堿性磷酸酶標記。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其中，所述支持介質(zhì)包括微孔濾膜板。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測試劑盒，其中，所述支持介質(zhì)包括披覆PVDF薄膜微孔培養(yǎng)板。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其中，所述試劑盒中還包括下列試劑中的一種或多種：

1)親和素-堿性磷酸酶結(jié)合物；

2)底物液；

3)濃縮PBS緩沖液、封閉液、細胞培養(yǎng)液、洗滌液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測試劑盒，其中，所述底物液可為液氮藍四唑/5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸NBT/BCIP底物液，

所述封閉液包括脫脂乳液、FBS、BSA或酪蛋白，以及

所述洗滌液包括磷酸鹽緩沖液或磷酸鹽吐溫緩沖液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7任一項所述的檢測試劑盒在用于非診斷目的的牛布魯菌感染檢測中的應用，其中，所述非診斷目的包括流行病學分析和研究、離體組織進行檢測、表位鑒定研究以及定性和定量檢驗布魯菌抗原特異的牛IFN-γ。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用，其中，所述應用為用于非診斷目的的牛布魯菌感染或布魯菌抗原特異的牛IFN-γ的早期檢測中的應用。