[發明專利]一種利用固定化乳糖酶制備無乳糖乳制品的方法

在審

• 申請號: 201610197991.6
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105713891A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 陳毅忠;張明;林茂平
• 申請（專利權）人: 常州市奧普泰科光電有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N9/38;A23C9/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用固定化乳糖酶制備無乳糖乳制品的方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）按接種量為10%將脆壁克魯維酵母菌接種于馬鈴薯培養基上，移入恒溫箱中于30～35℃下培養3～4天后，用棉簽刮下孢子移入200～300mL滅菌后的質量濃度為0.9%的鹽水中，放置在漩渦振蕩儀中，以30～40W功率振蕩分散30～40min制得孢子懸液，通過滅菌后的漏斗過濾，得孢子；

（2）再按1×10⁴～2×10⁴個/mL的接種量，將上述所得的孢子轉接于發酵培養基中，于25～35℃條件下培養7～8天后過濾，得到發酵液，再用雙層濾紙抽濾去除多余孢子，即得粗酶液；

（3）量取300～400mL得到的粗酶液，向里加入10～12g硫酸銨，于4～6℃的冰水浴中靜置鹽析12～14h后用高速離心機以10000～12000r/min轉速離心分離得到沉淀，最后用pH為5.5的醋酸和醋酸鈉緩沖液洗滌脫鹽后即得純化乳糖酶，備用；

（4）稱取100～200g凹凸棒土用研缽研磨后過100目標準篩，分別用濃度為0.1mol/L鹽酸和0.3mol/L氫氧化鈉溶液搖床振蕩浸漬10～12h，再放入馬弗爐于300～400℃下煅燒3～4h，得固定化酶載體；

（5）稱取10～20g固定化酶載體裝入1L錐形瓶中，加入400～500mLpH為7.0由磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉組成的磷酸緩沖液，靜置10～12h后，再加入1～2g備用的純化乳糖酶，移入4～6℃冰水浴中，用磁力攪拌機以300～400r/min轉速進行攪拌；

（6）在攪拌的過程中再加入50～60mL質量濃度為2%戊二醛溶液，升高水浴溫度至30～35℃，繼續攪拌交聯反應4～6h后，過濾得濾渣，移入布氏漏斗中用pH為7.0磷酸緩沖液反復抽濾洗滌3～5遍后，即得固定化乳糖酶；

（7）稱取1～2L原料乳、1～2g果膠、3～5g木糖醇和2～3g上述制得的固定化乳糖酶混合均勻后倒入酶解罐，設置酶解溫度為35～40℃，保溫酶解10～12h后，過濾回收固定化乳糖酶，將得到的酶解乳制品瞬時高溫滅菌后即得利用固定化乳糖酶制備的無乳糖乳制品。

2.根據權利要求1所述的一種利用固定化乳糖酶制備無乳糖乳制品的方法，其特征在于：所述的馬鈴薯培養基是由200～300g馬鈴薯、20～30g葡萄糖、15～20g瓊脂和1L蒸餾水復配制得。

3.根據權利要求1所述的一種利用固定化乳糖酶制備無乳糖乳制品的方法，其特征在于：所述的發酵培養基是由5～10g果膠、20～30g玉米、15～20g豆粕粉、2～3g硝酸銨、10～12g磷酸氫二鉀和1L蒸餾水復配制得。