[發明專利]一種海洋小單孢菌發酵生產Rakicidins類化合物的方法

有效

• 申請號: 201610197210.3
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105779348B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 周劍;林風;江紅;連云陽;江宏磊;方東升;陳麗;趙薇
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/04;C12R1/29
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 孫立冰

1.一種發酵生產Rakicidins類化合物的方法，包括：將保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.12132的小單孢菌(Micromonospora sp)進行固體斜面培養、搖瓶種子培養、種子罐培養、發酵罐發酵培養，后處理即得，其特征是：發酵培養基的組分及各組分的重量百分含量為：可溶性淀粉3～6、蔗糖0.5～2.0、黃豆餅粉1.0～3.0、酵母粉1.0～3.0、MgSO₄·7H₂O 0.04、FeSO₄·7H₂O 0.005、CuSO₄·5H₂O 0.005、CoCl₂·6H₂O 0.0005、CaCO₃ 0.3～0.6，自來水配制，pH 7.5，且在發酵罐發酵開始階段就補加氨基酸，所述的Rakicidins類化合物選自下列任一結構的化合物：

2.根據權利要求1的方法，其中所述補加的氨基酸選自纈氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸中的一種或幾種。

3.根據權利要求2的方法，其中添加纈氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸的濃度分別至0.05～0.3％、0.05～0.3％、0.05～0.3％，均為重量百分比。

4.根據權利要求1的方法，包括：

a.固體斜面培養：保藏編號為CGMCC NO.12132的小單孢菌接種于固體斜面，后于30-37℃恒溫培養10-15天，后常溫保藏；

b.搖瓶種子培養：在500ml三角瓶中裝入種子培養基80ml，121℃消毒30分鐘，冷卻后接種孢子懸液，于搖床230rpm，28-35℃培養48小時；

c.種子罐培養：將搖瓶培養好的種子合并，以種子罐裝液量的1-5％接種到種子罐培養基中，200-300rpm，通氣量1:1vvm，28℃，培養48小時；

d.發酵罐發酵培養：將種子罐培養好的種子以5-10％的接種量接種到發酵罐中，培養時間為72-100小時，發酵轉速控制200-400rpm、通氣量控制0.08-1.2vvm，在發酵過程中添加纈氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸中的一種或幾種作為發酵的前體物。

e.后處理，即得。

5.根據權利要求4的方法，其中纈氨酸濃度為0.05-0.3％、甘氨酸濃度為0.05-0.3％、甲硫氨酸濃度為0.05-0.3％。

6.根據權利要求4的方法，其中搖瓶種子培養步驟中種子培養基的組分及各組分的重量百分含量為：可溶性淀粉1～3、葡萄糖0.5～1.0、酵母粉1～2、蛋白胨0.5～2.0、MgSO₄·7H₂O 0.05、FeSO₄·7H₂O 0.005、CuSO₄·5H₂O 0.005、CoCl₂·6H₂O 0.0005、CaCO₃ 0.1～0.3，自來水配制，pH,7.0～7.5。

7.根據權利要求4的方法，其中后處理方法包括：取發酵液加入甲醇混合均勻，超聲波處理后10000rpm離心，取清液于0.45um膜過濾后用于測定發酵液各組分效價。