[發(fā)明專利]Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的新用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610196784.9
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN107286227B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁雪峰
• 申請（專利權(quán)）人: 南京諾云生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/36
• 分類號: C07K14/36;C12P17/12
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 張慧清

本發(fā)明涉及Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的新用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。具體來說，是指Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白作為催化劑的用途。通過其催化L?2?哌啶甲酸的合成體系，具有底物投量高，反應(yīng)時間短，產(chǎn)物ee值高的特點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的新用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白是來源于Streptomyces hirsutus的一種蛋白，其氨基酸序列為序列表中序列2。用于其編碼的基因序列為序列表中序列1。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的一種新用途，具體來說，是指其作為催化劑的用途。

更進(jìn)一步地，是用以催化L-賴氨酸鹽酸鹽或L-賴氨酸生物轉(zhuǎn)化制備L-2-哌啶甲酸的反應(yīng)。

為了實(shí)現(xiàn)Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的催化作用，我們需要獲得一種可以高效表達(dá)這一蛋白的菌體，從而以全細(xì)胞催化劑的形式將其加入到反應(yīng)體系中。

在本發(fā)明中，我們選定的用于高效表達(dá)Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的菌體為大腸桿菌。然而，在Streptomyces hirsutus ATCC 19091中用以編碼Streptomyces hirsutus ATCC 19091蛋白的野生型基因序列GC含量過高，在宿主菌中培養(yǎng)時難以實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)錄。故通過全基因合成的方法，對基因的二級結(jié)構(gòu)以及密碼子偏好性進(jìn)行調(diào)整，并且調(diào)整DNA序列的GC含量到40％～60％，以實(shí)現(xiàn)在大腸桿菌中的高表達(dá)。

首先，我們利用Primer Premier(http://primer3.ut.ee/)和OPTIMIZER(http://genomes.urv.es/OPTIMIZER/)進(jìn)行設(shè)計(jì)，并保證Tm差異控制在3℃以內(nèi)，引物長度控制在50base以內(nèi)，得到以下引物：

合成上述引物，并將獲得的引物加雙蒸水溶解后，加到如下的反應(yīng)體系中，使得各引物的終濃度為30nM，首尾引物的終濃度為0.6μM。

2mM dNTP mix(2mM each dNTP)	5μl
10×Pfu buffer	5μl
Pfu DNA polymerase(10U/μl)	0.5μl
ddH2O	使得反應(yīng)體系總體積至50μl